Inhaltszusammenfassung für peviva M30 Apoptosense ELISA
Seite 1
M30 Apoptosense® ELISA 10011 Instructions for Use Bruksanvisning Gebrauchsanweisung Mode d’emploi Instruzioni per l’uso Instrucciones de uso Instruções de utilização In USA, Canada and Japan For research and laboratory use only. Not for human or diagnostic use.
Seite 3
M30 Apoptosense® ELISA M30 Apoptosense® ELISA Instructions for Use English: page 5 – 15 Bruksanvisning Svenska: sida 17 – 27 Gebrauchsanweisung Deutsch: Seite 29 – 39 Mode d’emploi Français: pages 41 – 51 Instruzioni per l’uso Italiano: pagina 53 – 63 Instrucciones de uso Español: página 65 –...
M30 Apoptosense® ELISA Instructions for Use of the M30 Apoptosense® ELISA Contents Explanation of Symbols Used on Labels Trademarks Patents Shipping and Storage Assay Description Intended Purpose Summary and Explanation of the Test Principle of the Method Materials Provided for 96 Determinations Materials Required but not Provided Assay Protocol Warnings and Precautions...
Manufacturer Temperature limitation Use by Consult Instructions for Use Trademarks M30®, Apoptosense®, M65®, EpiDeath® and PEVIVA® are registered trademarks of VLVbio (VLVbio AB). Patents European patent number EP 1 019 438. U.S. patents number 6,296,850 and 6,716,968 and 6,706,488. Canadian patent number 2305681.
The ccK18 increase during apoptosis is inhibited by the caspase-inhibitor zVAD-fmk (ref. 3). The M30 Apoptosense ELISA can be used in combination with the M65® ELISA (PEVIVA Prod. No. 10020) which measures total K18. Combining the two assays is useful for assessment of cell death mode (ref.
Instructions for Use By plotting a standard curve from known concentrations versus measured absorbance, the amount of antigen in the sample can be calculated. The concentration of the antigen is expressed as units per litre (U/L). Materials Provided for 96 Determinations M5 Coated Microstrips: One microplate, 12 strips with 8 wells each, 96 dry wells in total.
Serum: Collect blood by venipuncture, avoiding haemolysis, into plain tubes (without anti-coagulant), allow blood to clot and collect serum after centrifugation. Plasma: The M30 Apoptosense ELISA can also be used for plasma samples (EDTA or heparin). Note! The same type of material, i.e. serum or plasma collected by one method, should be used for a specific project.
Coated Microstrips. Sample preparation from cell culture supernatants The M30 Apoptosense ELISA and M65® ELISA can be used to assess cell death mode by calculation of an M30:M65 ratio (ref. 3). Such measurements should be performed using medium supernatants! The ratio should be calibrated for each carcinoma cell line using appropriate controls, i.e.
M30 Apoptosense® ELISA Day 2 – 4: Collect the sample medium from each well. To avoid drying effects, collecting multiple samples from the same well is not recommended. Centri- fuge the medium and collect the cell-free supernatant. Note! Avoid collecting cells.
Instructions for Use Assay Procedure The M30 Apoptosense ELISA should be performed at room temperature (24 ± 3 °C). Allow all reagents to reach room temperature before performing the assay. Vortex all reagents prior to use. Dissolve the Wash Tablet in fresh deionised water (see “Component Prepara- tion”).
Read absorbance after 5 – 30 min. Calculation of Analytical Results The M30 Apoptosense ELISA results are calculated using computer-assisted methods. Evaluate the values of controls and samples using a suitable pro- gram for handling ELISA-type data. Fitting algorithm: Cubic Spline. x-axis: con- centration (U/L);...
% CV) variation is ≤ 10 % and total variation is ≤ 10 % for samples over 200 U/L. Sensitivity: The minimum detectable concentration of K18Asp396 neo-epitope in the M30 Apoptosense ELISA is 20 U/L, defined as the concentration of ccK18 that corresponds to the absorbance being two standard deviations from the ab- sorbance of the Standard A (0 U/L).
M30 Apoptosense® ELISA Limitations of the Method The clinical utility of ccK18 measurement in human blood samples as a prog- nostic indicator and in the management of patients on therapy regimens has not been fully established. Grossly lipemic (≤ 1 250 mg/dL), icteric (≤ 12.5 mg/dL) or haemolysed (≤...
Seite 17
M30 Apoptosense® ELISA Bruksanvisning för M30 Apoptosense® ELISA Innehållsförteckning Förklaring av symbolerna som används på etiketterna Varumärken Patent Leverans och förvaring Beskrivning av testet Avsedd användning Sammanfattning och metodens princip Testprincip Material för 96 bestämningar Material som krävs men inte tillhandahålls Testförfarande Varningar och försiktighetsåtgärder Provtagning och hantering av blodprover...
Lot nummer Tillverkare Temperaturbegränsning Använd före Se handhavandebeskrivningen Varumärken M30®, Apoptosense®, M65®, EpiDeath® och PEVIVA® är varumärken registrerade av VLVbio (VLVbio AB). Patent Europeiskt patent EP 1 019 438. U.S.-patent 6,296,850 och 6,716,968 och 6,706,488. Japanskt patent 4372340. Kanadensiskt patent 2305681.
Ökningen av ccK18-nivåerna under apoptos häm- mas av bredspektrum-caspasinhibitorer som zVAD-fmk (ref. 3). M30 Apoptosense ELISA kan användas i kombination med M65® ELISA (PEVIVA prod. nr 10020) vilken mäter totalt K18. Kombinerad användning av de två...
Bruksanvisning Färgreaktionen stoppas och absorbansen läses av. Färgintensiteten är direkt proportionell mot analytens koncentration. Genom att konstruera en standardkurva med kända koncentrationer mot absorbans kan mängden antigen i provet avläsas. Antigenkoncentrationen anges i enheter per liter (U/l). Material för 96 bestämningar M5 Coated Microstrips: En mikrotiterplatta innehållande 96 torra brunnar (12 strips ×...
2 × 25 µl). Patienten behöver inte vara fastande före provtagning. Serum: Blod samlas genom venpunktion i vakuumrör (utan antikoagulant). Undvik hemolys. Låt blodet koagulera och separera serum från celler/koagel. Plasma: M30 Apoptosense ELISA kan även användas för plasmaprover (rör inne hållande EDTA eller heparin). OBS! Samma typ av provmaterial bör användas under ett specifikt projekt dvs...
Bruksanvisning Provtagning och hantering av prover för utvecklingsändamål M30 Apoptosense ELISA har använts för mätningar i cellkulturer i flera publi- cerade studier (se www.vlvbio.com för referenser). Peviva har utvecklat en specifik produkt för in vitro-cellkulturer, M30 CytoDeath™ ELISA (PEVIVA prod.
M30 Apoptosense® ELISA Förvara proverna vid 2–8 °C om testet utförs under samma dag. Förvara prover som ska analyseras vid ett senare tillfälle vid -20 °C eller lägre. Unvik upprepad frystining. Spädning av komponenter Spädning av M30 Conjugate Späd M30 Conjugate med M30 Conjugate Dilution Buffer. Flaskan med M30 Conjugate innehåller exakt 400 µl konjugerad antikroppslösning.
Bruksanvisning Testprocedur M30 Apoptosense ELISA ska utföras vid rumstemperatur (24 ± 3 °C). Rumstemperera alla komponenter och prover före testsättning. Vortexa före användning. Lös upp Wash Tablet med färskt avjoniserat vatten (se avsnitt “Spädning av komponenter”). Späd M30 Conjugate med M30 Conjugate Dilution Buffer och blanda or- dentligt (se avsnitt “Spädning av komponenter”).
Läs absorbans efter 5 min. Beräkning av resultaten Testresultat från mätningen i M30 Apoptosense ELISA beräknas med hjälp av ett datorprogram. Utvärdera mätvärden för kontroller och prover med hjälp av ett lämpligt program för hantering av denna typ av data. Anpassnings- algoritm: Kubisk spline.
> 200 U/l. Känslighet: Den lägsta detekterbara koncentrationen av M30-antigen som kan mätas med M30 Apoptosense ELISA är 20 U/l, vilket motsvarar den absorbans som ligger 2 standardavvikelser från absorbansen för 0 U/l. Spiking recovery: När en hög standard tillsätts till ett mänskligt blodgivarprov erhålls i medel 109 % av förväntat koncentration inom spannet 98 –...
M30 Apoptosense® ELISA Metodens begränsningar Det kliniska värdet av serummätningar av ccK18 som prognosfaktor eller för monitorering av behandlingssvar är ännu inte fullt klarlagt. Lipemiska (≤ 1 250 mg/dl), ikteriska (≤ 12,5 mg/dl) eller homolyserade (≤ 50 mg/dl) prover påverkar inte testresultaten. Litteratur och referenser Leers et al., J Pathol.
Seite 29
M30 Apoptosense® ELISA Gebrauchsanweisung für M30 Apoptosense® ELISA Inhaltsangabe Erklärung der auf den Etiketten benutzten Symbolen Handelsmarken Patente Lagerung und Versand Testdurchführung Verwendungszweck Zusammenfassung und Erklärung des Tests Testprinzip Reagenzien für 96 Bestimmungen Zusätzlich Benötigtes Material Testprotokoll Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen Blutentnahme und Handhabung der Proben In vitro-Probengewinnung und -Handhabung für die Forschung Verdünnung der Komponenten...
Hersteller Temperaturbegrenzung Verwendbar bis Gebrauchsanweisung beachten Handelsmarken M30®, Apoptosense®, M65®, EpiDeath® und PEVIVA® sind eingetragene Handels- marken von VLVbio (VLVbio AB). Patente Europäisches Patent Nummer EP 1 019 438. U.S.-Patente Nummer 6,296,850 und 6,716,968 und 6,706,488. Kanadisches Patent Nummer 2305681.
Tumorapoptose bei Mäusen oder Ratten mit menschlichen Tumor- xenotransplantaten (Ref. 5). Der M30 Apoptosense ELISA wird in der Forschung, in klinischen Studien und in der klinischen Routine zur Beurteilung der Krankheitsaktivität und -verlau- fes im Bereich der Hepatologie, Onkologie und der Transplantationsmedizin verwendet.
Gebrauchsanweisung auf K18 gerichtet ist und mit dem mit HRP (Meerrettichperoxidase) konjugierten Antikörper M30, der auf das K18Asp396-Neoepitop gerichtet ist. Ungebundnes Konjugat wird durch einen Waschprozess entfernt. TMB-Substrat wird zugge- ben. Die Farbentwicklung wird beendet und die Absorption gemessen. Die re- sultierende Färbung ist direkt proportional zur Konzentration des M30-Gehalts.
Serum: Blutgewinnung durch Venenpunktion in einfachen Röhrchen (ohne Antikoagulans) unter Vermeidung von Hämolyse, anschließend Abtrennung der Zellen vom Serum. Plasma: M30 Apoptosense ELISA kann auch für Plasmaproben (EDTA oder He- parin) verwendet werden. Achtung! Im Rahmen eines Projekts sollte stets das gleiche Probenmaterial, d.h.
Coated Microstrips. Handhabung der Proben aus Zellkulturüberständen M30 Apoptosense ELISA und M65® ELISA kann zur Bewertung der Art des Zell- todes durch Berechnung eines M30:M65-Verhältnisses (Ref. 3) verwendet wer- den. Die Erstellung eines derartigen Verhältnisses sollte allerdings auf die Be- stimmung von Zellkulturüberständen beschränkt sein.
M30 Apoptosense® ELISA Mitteln, die bekanntlich Apoptose einleiten (z. B. genotoxische Mittel, Stauro- sporin) und/oder hauptsächlich zur Nekrose führen (z. B. Oligomycin/Gluko- seentzug oder Wasserstoffperoxid). Tag 1/Tag 2: Aussäen der Zellen, waschen und Zugabe der Testsubstanzen wie vorstehend beschrieben. Tag 2 – 4: Aufnehmen des Probenmediums von jeder Mulde. Um eine Aus- trocknung zu vermeiden, sollten nicht mehrere Proben aus der gleichen Mulde aufgenommen werden.
M30 Conjugate-Lösung ist 3 Wochen haltbar. Die aufgelöste Wash Tablet ist bei Lagerung bei 2 – 8 °C 5 Wochen haltbar. Testprotokoll Der M30 Apoptosense ELISA muss bei Raumtemperatur (24 ± 3 °C) durchge- führt werden. Vor dem Durchführen des Tests alle Reagenzien auf Raumtemperatur brin- gen.
(Intra-Assay % VK) < 10 % und die Inter-Assay-Abweichung (Inter-Assay % VK) beträgt < 10 %. Empfindlichkeit: Die nachweisbare Mindestkonzentration von K18Asp396-Neo- epitop in M30 Apoptosense ELISA liegt bei 20 U/l. Sie ist definiert als die M30- Konzentration, die dem Absorptionswert der zweifachen Standardabweichung vom Absorptionswert des Standards 0 U/l entspricht.
M30 Apoptosense® ELISA Wird diese Vorgehensweise nicht als ausreichend angesehen, muss das Labor seine eigenen Kontrollen an Hand der Richtlinien in Abschnitt „In vitro-Probengewinnung und -Handhabung für die Forschung” oder durch individuelle Laborroutinen herstellen. Diese Kontrollen müssen in aliquoten Mengen eingefroren werden und sind bei jedem Test gleich zu behandeln. Grenzen der Methode Der klinische Nutzen der Messung von ccK18 in menschlichen Blutproben als prognostischer Indikator und in der Patientenbetreuung während der...
Seite 41
M30 Apoptosense® ELISA Mode d’emploi du test M30 Apoptosense® ELISA Résumé Explication des symboles utilisés sur les étiquettes Marques déposées Brevets Transport et conservation Description du test Utilisation prévue Résumé et explication du test Matériel fourni pour 96 mesures Matériel requi mais non fourni Protocole de test Avertissements et précautions Collecte et préparation des spécimens sanguins...
Limites de température Utiliser jusque Consulter les instructions d’utilisation Marques déposées M30®, Apoptosense®, M65®, EpiDeath® et PEVIVA® sont des marques déposées de VLVbio (VLVbio AB). Brevets Brevet européen numéro EP 1 019 438. Brevets américains numéro 6,296,850 et 6,716,968 et 6,706,488.
à une nécrose secondaire des corps apoptotiques. L’augmentation de ccK18 pendant l’apoptose est contrée par l’inhibiteur de caspase zVAD-fmk (réf. 3). Le test M30 Apoptosense ELISA peut être utilisé en association avec le test M65® ELISA (PEVIVA produit № 10020) qui mesure la concentration totale de K18. La combinaison des deux tests permet d’évaluer le mode de mort cellulaire (réf.
Mode d’emploi l’anticorps M30 conjugué au HRP (peroxydase du raifort), dirigé contre le néo- épitope K18Asp396. Une étape de lavage permet d’éliminer le conjugué non lié. Le substrat TMB est ajouté. Le développement de la couleur est stoppé puis l’absorbance est lue. La couleur résultante est directement proportionnelle à la concentration de l’analyte.
Sérum : prélever le sang par ponction veineuse dans des tubes secs (sans anti- coagulant) en prenant soin d’éviter toute hémolyse avant de séparer le sérum des cellules. Plasma : le test M30 Apoptosense ELISA peut également être utilisé pour des échantillons de plasma (EDTA ou héparine). Page 45...
Collecte et préparation des échantillons in vitro uniquement à usage de recherche Le test M30 Apoptosense ELISA a été utilisé pour des applications relatives à la culture cellulaire dans un certain nombre d’études publiées (voir les références sur www.vlvbio.com). Peviva a développé un produit spécifique destiné à la culture cellulaire in vitro, M30 CytoDeath™...
Préparation des échantillons à partir des surnageants de cultures cellulaires Les tests M30 Apoptosense ELISA et M65® ELISA peuvent être utilisés pour évaluer le mode de mort cellulaire en calculant le rapport M30:M65 (réf. 3). Ces mesures doivent être effectuées à partir du milieu surnageant ! Le rapport doit être calibré...
Conservée à 2 – 8 °C, la solution de la pastille Wash Tablet reste stable pendant 5 semaines. Méthode d’analyse Le test M30 Apoptosense ELISA doit être effectué à température ambiante (24 ± 3 °C). Laisser les réactifs atteindre la température ambiante avant d’effectuer le test.
M30 Apoptosense® ELISA 10. Ajouter 50 µL de Stop Solution à chaque puits. Afin de s’assurer que le TMB Substrate et la Stop Solution sont bien mélangés, agiter la microplaque pendant 5 à 10 secondes. Laisser reposer la microplaque pendant 5 minutes avant de lire l’absorbance.
(% CV inter-essai) est < 10 % pour les échantillons > 200 U/L. Sensibilité : la concentration minimale détectable de néo-épitope K18Asp396 dans le test M30 Apoptosense ELISA est de 20 U/L, définie comme étant la concentration de M30 correspondant à l’absorbance à deux écarts-types de l’absorbance du Standard 0 U/L.
M30 Apoptosense® ELISA Contrôle interne de qualité Les Controls Low & High fournis avec leurs concentrations devraient suffire pour assurer la bonne performance du test et devront être utilisés au moins en duplicats chaque fois qu’un test est effectué. Si cette procédure ne suffit pas, chaque laboratoire devra établir ses propres témoins selon les recommandations de la section «...
Seite 53
M30 Apoptosense® ELISA Istruzioni per l’uso del kit ELISA M30 Apoptosense® Indicazione del contenuto Spiegazione dei simboli utilizzati sulle etichette Marchi Brevetti Trasporto e conservazione Descrizione del test Scopo proposto Sommario e spiegazione del test Principio del procedimento Reagenti forniti per 96 determinazioni Materiale occorrente non incluso Procedimento del test Precauzioni e avvertenze...
Limiti di temperatura Utilizzare entro Consultare le instruzioni per l’uso Marchi M30®, Apoptosense®, M65®, EpiDeath® e PEVIVA® sono marchi registrati di VLVbio (VLVbio AB) Brevetti Numero di brevetto europeo EP 1 019 438. Numero di brevetto USA 6,296,850 e 6,716,968 e 6,706,488.
M30 Apoptosense® ELISA Descrizione del test Scopo proposto Il kit ELISA M30 Apoptosense® è un metodo immunologico diretto in vitro per la determinazione quantitativa del neoepitopo ccK18, K18Asp396 o M30, associato ad apoptosi, nel siero e nel plasma. Sommario e spiegazione del test Durante l’apoptosi, le caspasi separano diverse proteine cellulari.
Instruzioni per l’uso TMB. Si blocca lo sviluppo del colore e si legge l’assorbanza. Il colore risultante è direttamente proporzionale alla concentrazione dell’analita. La quantità di antigene nel campione può essere calcolata da una curva standard sulla quale sono riportate concentrazioni note in funzione dell’assorbanza misurata.
M30 Apoptosense® ELISA Materiale occorrente non incluso • Lettore di micropiastre (lunghezza d’onda 450 nm, densità ottica lineare da 0–3) • Agitatore per micropiastre (oscillazioni: 600 rpm, orbita: 1,5–4 mm) • Dispositivo per il lavaggio di micropiastre a 96 pozzetti o pipetta multicanale (volume 250 µl) •...
ELISA M30 Apoptosense è stato utilizzato per applicazioni di colture cel- lulari in un certo numero di studi pubblicati (per i riferimenti andar al sito www.vlvbio.com). Peviva ha sviluppato un prodotto specifico per la coltura delle cellule in vitro, M30 CytoDeath™ ELISA (PEVIVA Prod No 10900).
M30 Apoptosense® ELISA Giorno 1/Giorno 2: piastrare le cellule, lavare e aggiungere gli agenti come descritto sopra. Giorno 2–4: prelevare il mezzo del campione da ogni pozzetto. Per evitare che il pozzetto vada a secco, si sconsiglia di prelevare più campioni dallo stesso pozzetto.
Instruzioni per l’uso Se il kit viene utilizzato più volte, conservare M30 HRP Conjugate diluito nella fiala a 2–8 °C. Non esporre alla luce. La soluzione diluita M30 Conjugate è stabile per 3 settimane. La soluzione preparata della Wash Tablet rimane stabile per 5 settimane se con- servata a 2 –...
M30 Apoptosense® ELISA Schema del procedimento Diluire M30 Conjugate e dissolvere la Wash Tablet. ↓ Pipettare 25 μl di standard, controlli e campioni in ogni pozzetto. ↓ Aggiungere 75 µl di M30 Conjugate Solution ad ogni pozzetto. ↓ Incubare per 4 ore sull’agitatore per piastre (600 rpm). ↓...
1 U/l = 1,24 pM (Ref. 8). A causa di buffer di test diversi, il materiale standard non può essere scambiato tra kit Peviva diversi. Controllo di qualità interno I controlli Low e High inclusi con le loro concentrazioni dovrebbero essere sufficienti per garantire la prestazione del test e dovrebbero essere impiegati almeno in duplicato ogni volta che si esegue il test.
M30 Apoptosense® ELISA Limitazioni del procedimento L’utilità clinica della misurazione di ccK18 in campioni di sangue umano come indicatore prognostico e nella cura dei pazienti sottoposti a regimi di terapia non è stata completamente stabilita. I campioni fortemente lipemici (= 1.250 mg/dl), itterici (= 12.5 mg/dl) o emolizzati (= 50 mg/dl) non interferiscono con il test.
M30 Apoptosense® ELISA Instrucciones de uso del M30 Apoptosense® ELISA Resumen Resumen Explicación de los símbolos utilizados en las etiquetas Marcas comerciales Patentes Envío y almacenamiento Descripción del análisis Objetivo previsto Resumen y explicación de la prueba Principio del método Materiales suministrados para 96 determinaciones Materiales necesarios pero no incluidos Protocolo del ensayo...
Límite de temperatura Fecha de caducidad Consulte las instrucciones de uso Marcas comerciales M30®, Apoptosense®, M65®, EpiDeath® y PEVIVA® son marcas comerciales regis- tradas de VLVbio (VLVbio AB). Patentes Número de patente europea EP 1 019 438. Patentes estadounidenses números 6.296.850 y 6.716.968 y 6.706.488.
(ref. 3) inhibe el aumento de ccK18 durante la apoptosis. M30 Apoptosense ELISA se puede usar en combinación con M65® ELISA (PEVIVA Prod. No 10020) que mide la K18 total. La combinación de los dos análisis resulta útil para valorar el modo de muerte celular (ref. 4).
Instrucciones de uso El conjugado no unido se elimina en un paso de lavado. Se añade sustrato TMB. El desarrollo del color se detiene y se lee la absorbancia. El color resultante es directamente proporcional a la concentración del analito. Representando una curva estándar a partir de las concentraciones conocidas frente a la absorbancia medida, se puede calcular la cantidad de antígeno que hay en la muestra.
• Agua desionizada Protocolo del ensayo Advertencias y precauciones El kit M30 Apoptosense ELISA está destinado exclusivamente para el uso in vitro. No mezcle reactivos de kits de distintos lotes. Todas las muestras de pacientes deben considerarse contagiosas y manipu- larse y desecharse de acuerdo con las normativas correspondientes.
Preparación de muestras de sobrenadantes de cultivos celulares M30 Apoptosense ELISA y M65® ELISA se pueden usar para valorar el modo de muerte celular calculando la relación M30:M65 (ref. 3). Dichas mediciones deben llevarse a cabo usando el medio sobrenadante. La relación se debe calibrar para cada línea celular de carcinoma usando los controles apropiados;...
M30 Apoptosense® ELISA sporina) y/o principalmente la necrosis (por ej.: oligomicina/carencia de glucosa o peróxido de hidrógeno). Día 1/Día 2: siembre las células, lávelas y añada los agentes como se ha descrito anteriormente. Día 2–4: recoja las muestras de medio de cada pocillo. Para evitar efectos de sec- ado, no se recomienda recoger varias muestras del mismo pocillo.
La solución de lavado preparada es estable durante 5 semanas cuando se guarda a 2 – 8 °C. Protocolo del ensayo El test M30 Apoptosense ELISA deberá llevarse a cabo a temperatura ambiente (24 ± 3 °C). Saque los reactivos y las muestras con tiempo para que estén a temperatura ambiente cuando sea la hora de realizar el análisis.
Leer la absorbancia después de 5 min. Cálculo de resultados analíticos Los resultados de M30 Apoptosense ELISA se calculan usando métodos asisti- dos por ordenador. Evalúe los valores de los controles y las muestras usando un programa adecuado para la manipulación de datos tipo ELISA. Algoritmo de ajuste: función Cubic Spline;...
(BA % CV) es < 10 % para muestras > 200 U/l. Sensibilidad: la concentración mínima detectable del neoepítopo K18Asp396 en M30 Apoptosense ELISA es de 20 U/l, definida como la concentración de M30 que corresponde a la absorbancia a dos desviaciones estándar con respecto a la absorbancia del Standard 0 U/l.
M30 Apoptosense® ELISA Limitaciones del método No se ha establecido plenamente la utilidad clínica de la medición de ccK18 como indicador pronóstico ni para el tratamiento de pacientes sometidos a regímenes de terapia. Las muestras muy lipémicas (≤ 1.250 mg/dl), ictéricas (≤ 12,5 mg/dl) o hemoliza- das (≤...
Seite 77
M30 Apoptosense® ELISA Instruções de utilização para o kit M30 Apoptosense® ELISA Conteúdos Explicação dos símbolos utilizados nos rótulos Marca Registada Patentes Transporte e Armazenamento Descrição do Ensaio Finalidade Sumário e explicação do teste Príncipio do Método Materiais fornecidos para 96 determinações Materiais Necessários não fornecidos Protocolo do Ensaio Avisos e Precauções...
Gama de Temperatura Usado por Consultar Instruções de Utilização Marca Registada M30®, Apoptosense®, M65®, EpiDeath® e PEVIVA® são marcas registadas da VLVbio (VLVbio AB). Patentes Número da patente europeia: EP 1 019 438. Números das patentes dos E.U.A.: 6,296,850 e 6,716,968 e 6,706,488.
é inibido pelo caspase-inibidor zVAD-fmk (ref. 3). O M30 Apoptosense ELISA pode ser utilizado em combinação com M65 ELISA (PEVIVA Prod. No. 10020) que mede a K18 total. A combinação dos dois imunoensaios é útil na abordagem do modo da morte celular (ref. 4).
Instruções de utilização O desenvolvimento de cor é parado por adição da solução stop e a absorvância lida. A cor resultante é directamente proporcional à concentração do analito. A curva de calibração é traçada num gráfico com a concentração dos calibradores conhecida vs a absorvância lida, a quantidade de antigénio na amostra pode ser calculada.
Soro: Colheita de sangue venoso, evitando hemólise, em tubos secos (sem anti-coagulantes). Após retracção do coágulo, centrifugue e o utilize o soro. Plasma: O kit M30 Apoptosense ELISA pode ser utilizado em plasma (EDTA ou Heparina). Nota! Num mesmo projecto, deverá...
M5. Preparação do sobrenadante da cultura celular O M30 Apoptosense ELISA e o M65 ELISA podem ser utilizados na abordagem da morte celular por cálculo do rácio M30:M65 (ref. 3). Estas quantificações podem ser efectuadas no sobrenadante! Os rácios devem ser calibrados para cada linha celular do carcinoma utilizando agentes conhecidos que induzam apoptose (p.e, agentes genotóxicos, saturosporina) e/ou maioritariamente necrose (p.e...
M30 Apoptosense® ELISA Preparação dos componentes Diluição do M30 Conjugate Dilua o M30 Conjugate com o tampão de diluição do M30 Conjuagte Dilution Buffer. O frasco de M30 Conjugate contém 0,4 ml. Adicione 9,2 ml de M30 Con- juaget Dilution Buffer directamente no frasco de M30 Conjugate e misture. Dissolução da Wash Tablet Dissolva uma pastilha em 500 ml de água desionizada.
Instruções de utilização Procedimento do Ensaio O M30 Apoptosense ELISA deve ser realizado à temperatura ambiente (24 ± 3 °C). Permita que os reagentes atinjam a temperatura ambiente antes de iniciar o ensaio. Vortex todos os reagentes antes de utilizar.
Agite 5 – 10 seg. Leia absorvâncias após 5 – 30 min. Cálculo e Análise dos Resultados Os resultados do M30 Apoptosense ELISA são calculados por métodos com- putacionais. Analise os valores dos controlos e amostras com um programa de tratamento de dados de ELISA adequado. Curva algorítmica: cubic spline.
(BA % CV) é ≤ 10 % e a variação total é ≤ 10 %, para amostras superiores a 200 U/L. Sensibilidade: A concentração minima detectável do neoepitopo K18Asp396 com o M30 Apoptosense ELISA é 20 U/L, definida como a concentração de ccK18 que corresponde à absorvância de dois desvios padrão da absorvância do Standard A (0 U/L).
M30 Apoptosense® ELISA Limitações do método A utilidade clínica da quantificação do ccK18 em amostras de sangue humanas como indicador de prognóstico e de abordagem de terapêuticas ainda não está completamente estabelecida. Amostras lipémicas (≤ 1 250 mg/dl), ictéricas (≤ 12,5 mg/dl) ou hemolisadas (≤ 50 mg/dl) não intereferem com o ensaio.
Seite 88
PEVIVA Products Ass ays M30 Apoptosense® ELISA M65® ELISA Prod. No. 10011 Prod. No. 10020 M30 CytoDeath™ ELISA M65 EpiDeath® ELISA Prod. No. 10900 Prod. No. 10040 Anti b o d ie s M30 CytoDEATH™ M5 Keratin 18 – Unconjugated Prod.