Testprotokoll; Mikrotiterplatte In Einem Mikrotiterplattenwascher Fünf Mal Mit - peviva M30 Apoptosense ELISA Gebrauchsanweisung

Gebrauchsanweisung
ginalen Braunglasflaschen bei 2 – 8 °C gelagert werden. Bei Verwendung eines
neuen Behälters ist für Lichtschutz zu sorgen. TMB Substrate kann nach Licht-
einwirkung nicht mehr benutzt werden.
Falls der Kit für verschiedene Anlässe verwendet wird, das verdünnte M30 Con-
jugate im Fläschchen bei 2 – 8 °C lagern und vor Licht schützen. Die verdünnte
M30 Conjugate-Lösung ist 3 Wochen haltbar. Die aufgelöste Wash Tablet ist bei
Lagerung bei 2 – 8 °C 5 Wochen haltbar.

Testprotokoll

Der M30 Apoptosense ELISA muss bei Raumtemperatur (24 ± 3 °C) durchge-
führt werden.
1. Vor dem Durchführen des Tests alle Reagenzien auf Raumtemperatur brin-
gen. Alle Reagenzien vor Gebrauch mit Hilfe des Wirbelmischers mischen.
2. Wash Tablet in frisch deionisiertem Wasser auflösen (siehe „Verdünnung
der Komponenten").
3. M30 Conjugate mit M30 Conjugate Dilution Buffer verdünnen (siehe „Ver-
dünnung der Komponenten") und mischen.
4. 25 µl M30 Standard (A – G), M30 Control Low, M30 Control High oder Probe
pro Mulde pipettieren (Duplikate werden empfohlen).
5. Zugabe von 75 µl der verdünnten M30 Conjugate-Lösung zu jeder Mulde.
Achtung! Die Schritte 4 und 5 müssen ohne Unterbrechung aufeinander fol-
gend innerhalb von 20 Minuten durchgeführt werden.
6. Mulden mit dem Sealing Tape oder einem Deckel für Mikrotiterplatten ab-
decken.
7. Vier Stunden auf dem Schüttler inkubieren (Geschwindigkeitseinstellung:
600 U/min).
8. Mikrotiterplatte in einem Mikrotiterplattenwascher fünf Mal mit
400 – 500 µl/Mulde waschen (Überlaufwaschen)
oder
Die Mikrotiterplatte von Hand waschen: Inkubationslösung verwerfen und
die Mulden fünf Mal mit 250 µl aufgelöster Wash Tablet waschen. Kreuzkon-
tamination zwischen den Mulden vermeiden.
9. Zugabe von 200 µl TMB Substrate zu jeder Mulde. Im Dunkeln bei
Raumtemperatur 20 ± 1 Minute inkubieren.
10. Zugabe von 50 µl der Stop Solution zu jeder Mulde. Mikrotiterplatte
5 – 10 Sekunden schütteln, um TMB Substrate und Stop Solution voll-
ständig zu vermischen. Mikrotiterplatte vor Ablesen der Absorption 5 Mi-
nuten stehen lassen.
11. Bestimmung der Absorption bei 450 nm in einem Absorptionslesegerät
für Mikrotiterplatten innerhalb von 30 Minuten und Aufzeichnen der
Ergebnisse.
12. Berechnen der Ergebnisse wie im Abschnitt „Berechnung der Analysener-
gebnisse" beschrieben.
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