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10. Ajouter 50 µL de Stop Solution à chaque puits. Afin de s'assurer que le TMB
Substrate et la Stop Solution sont bien mélangés, agiter la microplaque
pendant 5 à 10 secondes. Laisser reposer la microplaque pendant 5 minutes
avant de lire l'absorbance.
11. Déterminer l'absorbance à 450 nm avec un lecteur de microplaques dans un
délai de 30 minutes et noter les résultats.
12. Calculer les résultats comme indiqué dans la section « Calcul des résultats
de l'analyse ».

Organigramme

Diluer le M30 Conjugate, dissoudre la pastille Wash Tablet.
Incuber 4 heures sur agitateur de microplaques (600 tr/min).
Laver dans le laveur de microplaques avec 5 × 400 – 500 µL
(lavage des débordements), ou manuellement avec 5 × 250 µL.
Ajouter 200 µL de TMB Substrate à chaque puits.
Incuber à l'abri de la lumière pendant 20 ± 1 min.
Ajouter 50 µL de Stop Solution à chaque puits. Agiter
pendant 5 à 10 s. Lire l'absorbance au bout de 5 min.
Pipetter 25 µL d'étalons, de témoins ou
d'échantillons dans chaque puits.
Ajouter 75 µL de solution dilué de
M30 Conjugate à chaque puits.
M30 Apoptosense® ELISA
Page 49
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