Inhaltsverzeichnis
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5 Durchführen eines Experiments
5.1 Übersicht
5.1
Übersicht
Einführung
Dieser Abschnitt liefert einen Überblick über die zwei Haupttypen von Experimenten, die
durchgeführt werden können:
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In diesem Abschnitt wird auch der Workflow eines typischen Experiments beschrieben
(beschrieben in den folgenden Abschnitten), der mit dem Experimenttyp Western with
total protein normalization (Western mit Gesamtprotein-Normalisierung) veranschaulicht
wird.
Elektrophorese-Experimente
Bei Elektrophorese-Experimenten werden die Proben vor der Elektrophorese mit Cy5-
Farbstoff-Reagenz vormarkiert. Dies ermöglicht eine direkte Detektion der vormarkierten
Proteine in der Probe, wodurch die Notwendigkeit für eine nachträgliche Färbung des
Gels entfällt. Im Evaluierungsschritt nach dem Gel-Scannen wird die automatische
Analyse der Proteinbänder durchgeführt und die Ergebnisse werden in der Software
dargestellt.
Western-Experimente
In Western-Experimenten werden unmarkierte oder Cy5-vormarkierte Proteine während
der Elektrophorese im Gel getrennt und dann vom Gel auf eine Membran transferiert.
Die Membran wird mit primären und sekundären Antikörpern sondiert, die zum Nachweis
der Zielproteine mit Cy3- oder Cy5-Farbstoff konjugiert sind. Für den Gesamtprotein-
Nachweis wird die Probe mit Cy5 vormarkiert. Nach der Sondierung wird die Membran
getrocknet und danach gescannt. Im Auswertungsschritt wird eine automatische Ana-
lyse der Proteinbänder vorgenommen und die Ergebnisse werden in der Software dar-
gestellt.
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Elektrophorese-Experimente
Western Experimente (umfasst die Proteinelektrophorese)
Amersham WB system Bedienungsanleitung 29-0214-77 AE
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