Durchführen Des Prelabelings Von Proben (Western Prelabeling-Protokoll) - Ge Amersham Wb System Bedienungsanleitung

Durchführen des Prelabelings
von Proben (Western
Prelabeling-Protokoll)
Tipp:
Schritt
1
2
3
4
5
Amersham WB system Bedienungsanleitung 29-0214-77 AE
Das nachfolgende Protokoll kann aufskaliert werden.
Maßnahme
Die Markierungsreaktion in einem 0,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen durch-
führen:
2-19 μl Zelllysat- oder Gewebeextraktprobe hinzugeben (maximal 40 μg
•
Gesamtprotein) und mit Lysepuffer der Originalprobe auf ein Volumen
von 19 μl auffüllen.
Geben Sie 1 μl Cy5-Farbstoffreagenz, verdünnt 1:10 in Reinstwasser
•
hinzu.
Anmerkung:
Der verdünnte Farbstoff muss frisch zubereitet und innerhalb von 30 Mi-
nuten verwendet werden. Er kann nicht eingefroren und wiederverwendet
werden.
Zur sorgfältigen Durchmischung kurz kreisen lassen.
•
Bei Raumtemperatur für 30 Minuten inkubieren.
Anmerkung:
Markierungszeit und Volumen müssen für alle Proben gleich sein.
Bei temperaturempfindliche Proben für 30 Minuten auf Eis inkubieren.
Geben Sie 20 μl Ladepuffer hinzu.
Die Proben 3 Minuten lang auf 95 ºC erhitzen.
Zentrifugieren Sie die Proben. Das Gesamtprobenvolumen beträgt 40 μl pro
Reaktion (empfohlenes Ladevolumen beträgt 20 μl).
Mit dem Laden der Proben gemäß der Beschreibung in Vorbereitungen vor
dem Start der Elektrophorese, auf Seite 135 fortfahren.
Wenn die Elektrophorese-Analyse in einer späteren Phase durchgeführt
wird, die vormarkierten Proben bei -20 °C lagern.
5 Durchführen eines Experiments
5.4 Durchführen des Prelabelings von Proben
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