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Einführung
Mithilfe des PyroMark Q24 Kontroll-Oligonukleotids kann die ordnungsgemäße
Installation des PyroMark Q24 MDx Systems überprüft werden. Darüber hinaus
kann das PyroMark Q24 Kontroll-Oligonukleotid bei der Fehlersuche verwendet
werden, um festzustellen, ob ein unerwartetes Ergebnis auf einen Fehler des
Geräts, der PyroMark Q24 MDx Vakuum-Arbeitsstation oder des Assays
zurückzuführen ist.
Das PyroMark Prinzip und seine Anwendung
Beim PyroMark Q24 Kontroll-Oligonukleotid handelt es sich um ein biotiny-
liertes Oligonukleotid, das es dem Anwender ermöglicht zu prüfen, dass sowohl
das PyroMark Q24 MDx Gerät als auch die PyroMark Q24 MDx Vakuum-
Arbeitsstation ordnungsgemäß funktionieren.
Unter definierten Bedingungen bildet das Oligonukleotid eine Haarnadel- oder
Stamm-Schleifen-Struktur (stem–loop structure) aus. Diese Struktur ermöglicht
das Selbstpriming des Oligonukleotids zur Verlängerung durch die DNA-
Polymerase, sodass ein Sequenzierungs-Primer in der Pyrosequenzierungs-
reaktion nicht mehr benötigt wird. Der sequenzierte Bereich umfasst einzelne
Basen aller Nukleotide, Homopolymere aus zwei und drei Basen sowie eine
Wobble- (oder degenerierte) Base. Diese variable Position wird automatisch von
der Software analysiert und die Ergebnisse werden als „% C" und „% T"
dargestellt. In Abbildung 1 ist die Struktur des Oligonukleotids wiedergegeben.
A
B
Abbildung 1. Struktur des PyroMark Q24 Kontroll-Oligonukleotids.
Struktur des Oligonukleotids.
Oligonukleotids; der analysierte Sequenzabschnitt ist angegeben.
Kurzbeschreibung der Protokolle
Es wird empfohlen, zwei Läufe durchzuführen, um die ordnungsgemäße
Installation des PyroMark Q24 MDx Systems zu verifizieren.
PyroMark Q24 Control Oligo Handbuch 03/2015
Sequenzierter Abschnitt
B
Die durch Selbstpriming entstandene Struktur des
Biotin
Biotin
A
Die offene
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