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Inhaltszusammenfassung für Qiagen QIAamp DSP Virus Kit
- Seite 1 Juni 2022 QIAamp DSP Virus Kit ® Gebrauchsanweisung (Handbuch) Version 2 In-vitro-Diagnostikum Zur Verwendung mit dem QIAamp DSP Virus Kit ® 60704 QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, 40724 Hilden, DEUTSCHLAND 1127541DE Sample to Insight...
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Seite 2: Inhaltsverzeichnis
Erforderliche, nicht im Lieferumfang enthaltene Materialien ..........13 Zusätzliche Reagenzien ................... 13 Verbrauchsmaterialien ..................13 Ausstattung/Geräte ..................13 Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen ..............14 Sicherheitshinweise ..................14 Informationen für Notfälle ................15 Vorsichtsmaßnahmen ..................16 Entsorgung ....................17 QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... - Seite 3 Nukleinsäuren aus Plasma und Serum ................. 30 Qualitätskontrolle ...................... 35 Grenzen des Verfahrens .................... 36 Leistungsmerkmale ....................37 Hilfe zur Fehlerbehebung ................... 38 Symbole ........................43 Anhang ........................46 Bestellinformationen ....................47 Bearbeitungshistorie des Dokuments ................48 QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 4: Verwendungszweck
DSP Virus Kit ist für die manuelle Isolierung und Aufreinigung viraler ® Nukleinsäuren aus menschlichen Plasma- oder Serumproben vorgesehen. Das QIAamp DSP Virus Kit nutzt Silikamembran-Technologie (QIAamp Technologie) für die Isolierung und Aufreinigung von viralen Nukleinsäuren aus menschlichen Plasma- oder Serumproben. -
Seite 5: Beschreibung Und Prinzip
Leistungsmerkmale ermittelt; diese sind vom Anwender zu validieren. Lyse mit QIAGEN Protease (QP) Die Proben werden bei denaturierenden Bedingungen und erhöhten Temperaturen lysiert. Die Lyse erfolgt in Gegenwart von QIAGEN Protease (QP) und Lysepuffer (AL), die zusammen RNasen inaktivieren. Adsorption an die QIAamp MinElute Membran Die Bindungsbedingungen werden durch Zugabe von Ethanol eingestellt, um eine optimale Bindung der viralen RNA und DNA an die Membran zu ermöglichen. -
Seite 6: Entfernung Von Restlichen Kontaminanten
DSP Virus Kit in Verbindung mit exemplarischen nachgelagerten Anwendungen evaluiert. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, die Gebrauchsanweisung der jeweiligen nachgelagerten Anwendung in seinem Labor zu konsultieren und/oder den gesamten Arbeitsablauf zu validieren, um geeignete Lagerungsbedingungen festzulegen. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 7: Ausbeute Und Qualität Der Viralen Nukleinsäuren
Amplifikationen verwendet werden soll, müssen daher die Menge der zugesetzten Carrier-RNA berücksichtigen. Um in Amplifikationsreaktionen die höchstmögliche Sensitivität zu erreichen, kann es erforderlich sein, die zum Lysepuffer (AL) zugegebene Menge an Carrier-RNA anzupassen. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 8: Zugabe Interner Kontrollen
Kontrollmoleküle länger als 200 Nukleotide sein, da für kleinere Moleküle keine zufriedenstellende Wiederfindung erreicht wird. Ziehen Sie zur Bestimmung der optimalen Konzentration die Gebrauchsanweisung des Herstellers zurate. Die Verwendung nicht empfohlener Konzentrationen kann die Amplifikationseffizienz reduzieren. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... - Seite 9 3 Minuten lang bei 56 °C inkubieren. Eluieren QIAamp MinElute Säule in ET setzen. 20 µl oder 60 µl AVE zugeben. 3 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubieren. 1 Minute lang bei 14.000 U/min zentrifugieren. Reine virale Nukleinsäuren QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 10: Zusammenfassung Und Erläuterung
Zusammenfassung und Erläuterung Beim QIAamp DSP Virus Kit dient bewährte Technologie für die gleichzeitige Isolierung und Aufreinigung von viraler DNA bzw. RNA. Beim QIAamp DSP Virus Verfahren werden die selektiven Bindungseigenschaften einer silikabasierten Membran ausgenutzt, wobei die Elutionsvolumina minimal sind (20 µl oder 60 µl). -
Seite 11: Im Lieferumfang Enthaltene Materialien
Protease 1 Fläschchen ® ‡ – Gebrauchsanweisung (Handbuch) * Enthält Guanidinhydrochlorid. Nicht verträglich mit bleichehaltigen Desinfektionsmitteln. Sicherheitshinweise finden Sie auf Seite 14. Enthält Natriumazid als Konservierungsmittel. † Das Resuspensionsvolumen beträgt 4,4 ml. ‡ QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 12: Bestandteile Des Kits
Reagenz Aktiver Inhaltsstoff Konzentration (w/w) [%] QIAGEN Protease (QP) Subtilisin ≥ 90 bis ≤ 100 Guanidinhydrochlorid ≥ 30 bis < 50 Maleinsäure ≥ 0,1 bis < 1 Guanidinhydrochlorid ≥ 50 bis < 70 QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 13: Erforderliche, Nicht Im Lieferumfang Enthaltene Materialien
* Es darf kein denaturierter Alkohol verwendet werden, der andere Stoffe wie z. B. Methanol oder Methylethylketon enthält. † Stellen Sie vor dem Gebrauch sicher, dass die Geräte gemäß den Empfehlungen des Herstellers geprüft und kalibriert wurden. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 14: Warnhinweise Und Vorsichtsmaßnahmen
(SDB). In unserer Online-Sammlung der Sicherheitsdatenblätter unter www.qiagen.com/safety finden Sie zu jedem QIAGEN Kit und zu jeder Kit-Komponente das jeweilige SDB als praktische und kompakte PDF-Datei, die Sie einsehen und ausdrucken können. VORSICHT: Es dürfen keine bleichehaltigen oder sauren Lösungen zum Probenvorbereitungsabfall zugegeben werden. -
Seite 15: Informationen Für Notfälle
Sie Handschuhe und eine Schutzbrille tragen, um eine Verletzung bei Ihnen und anderen Personen zu vermeiden. QIAGEN hat den beim QIAamp DSP Virus Verfahren anfallenden Flüssigabfall nicht auf verbleibende infektiöse Materialien untersucht. Daher müssen bei der Arbeit mit diesem Produkt die allgemeinen Vorsichtsmaßnahmen im Umgang mit potenziell infektiösem... -
Seite 16: Vorsichtsmaßnahmen
Vorsichtsmaßnahmen Für die Komponenten des QIAamp DSP Virus Kit gelten die folgenden Gefahren- und Sicherheitshinweise. Lysis Buffer (AL) Enthält: Guanidinhydrochlorid, Maleinsäure. Warnung! Kann bei Verschlucken oder Einatmen schädlich sein. Verursacht Hautreizungen. Kann allergische Hautreaktionen verursachen. Verursacht schwere Augenreizung. Schutzhandschuhe/ Schutzkleidung/ Augenschutz/ Gesichtsschutz tragen. -
Seite 17: Entsorgung
Probenmaterialien enthalten sein, die sachgerecht entsorgt werden müssen. Bitte beachten Sie bei der Entsorgung die geltenden Sicherheitsbestimmungen. Weitere Informationen finden Sie in den jeweiligen Sicherheitsdatenblättern (SDB). Zu jedem QIAGEN Kit und zu jeder Kit-Komponente können Sie die jeweiligen SDB im PDF-Format online unter www.qiagen.com/safety abrufen, einsehen und ausdrucken. -
Seite 18: Lagerung Und Handhabung Der Reagenzien
Raumtemperatur (15–25 °C) gelagert werden. Lyophilisierte Carrier-RNA kann bis zu dem auf der Kit-Verpackung angegebenen Verfallsdatum bei Raumtemperatur gelagert werden. Lyophilisierte QIAGEN Protease (QP) kann ohne Leistungseinbußen bis zum Verfallsdatum bei Raumtemperatur gelagert werden. Stabilität nach dem Öffnen Carrier-RNA kann nur in Elutionspuffer (AVE) gelöst werden; die gelöste Carrier-RNA muss sofort wie auf Seite 24 beschrieben zum Lysepuffer (AL) zugegeben werden. - Seite 19 In Proteaselösemittel (PS) rekonstituierte QIAGEN Protease (QP) ist bei 2–8 °C bis zu 1 Jahr, jedoch maximal bis zum Verfallsdatum haltbar. Eine Aufbewahrung der QIAGEN Protease (QP) Stammlösung bei Raumtemperatur über längere Zeiträume ist zu vermeiden. Rekonstituierter Waschpuffer 1 (AW1) und rekonstituierter Waschpuffer 2 (AW2) sind bei Raumtemperatur bis zu 1 Jahr, jedoch maximal bis zum Verfallsdatum auf der Kit-Verpackung haltbar.
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Seite 20: Entnahme, Lagerung Und Handhabung Von Proben
Blutproben verwendet werden. Die Proben können frisch oder gefroren sein, vorausgesetzt, dass sie nicht mehr als einmal eingefroren und aufgetaut wurden. Tauen Sie gefrorene Proben unter leichtem Schütteln auf, sodass eine gründliche Durchmischung gewährleistet ist. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... - Seite 21 Blutentnahmeröhrchen die Reinheit der isolierten Nukleinsäuren beeinträchtigen und eine mögliche Verschleppung in Eluate kann bei einigen nachgelagerten Anwendungen zu einer Hemmung führen. Wir empfehlen daher die Verwendung von Blutproben, die mit EDTA oder Citrat als Antikoagulans behandelt wurden. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 22: Wichtige Hinweise
Blisterverpackungen oder die Pufferflaschen beschädigt sind, verständigen Sie den Technischen Service von QIAGEN oder Ihren Händler vor Ort. Für den Fall, dass Flüssigkeit ausgetreten ist oder verschüttet wurde, beachten Sie bitte den Abschnitt „Warnhinweise und Vorsichtsmaßnahmen“ (Seite 14). Verwenden Sie keine beschädigten Kit-Komponenten, da dies zu einer Beeinträchtigung der Leistung des Kits... -
Seite 23: Handhabung Der Qiaamp Minelute Säulen
Öffnen Sie stets nur eine QIAamp MinElute Säule und vermeiden Sie Aerosolbildung. Vorbereiten der Reagenzien und Puffer Vorbereiten der RNA Arbeiten Sie bei den manuellen Verfahrensschritten zur Isolierung von viraler RNA zügig und lesen Sie vor Beginn den Anhang auf Seite 46. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... - Seite 24 Ergebnisse fehlerhaft sein. Bei Berechnung der korrekten zu verwendenden Menge der internen Kontrolle müssen das Startvolumen der Probe und das Elutionsvolumen berücksichtigt werden. Es sei daran erinnert, dass das QIAamp DSP Virus Kit ein Startvolumen von 500 µl erfordert.
- Seite 25 = Volumen der Mischung aus Carrier-RNA und Elutionspuffer (AVE), das dem Lysepuffer (AL) zugegeben werden muss Mischen Sie vorsichtig durch zehnmaliges Umschwenken des Röhrchens. Um die Bildung von Schaum zu vermeiden, darf nicht mit dem Vortexer gemischt werden. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
- Seite 26 Die Verwendung von weniger als 5,6 µg Carrier-RNA pro Probe ist für jeden Probentyp und jeden nachgelagerten Assay separat zu validieren. * Wenn Sie eine interne Kontrolle verwenden, reduzieren Sie das Volumen des Lysepuffers (AL) entsprechend. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 27: Vorbereiten Von Waschpuffer 2 (Aw2)
Verfahren zu entsorgen. Enthält chaotropes Salz. Ergreifen Sie bei der Handhabung geeignete Laborsicherheitsmaßnahmen und tragen Sie Schutzhandschuhe. Nicht verträglich mit bleichehaltigen Desinfektionsmitteln. Sicherheitshinweise finden Sie auf Seite 14. Enthält Natriumazid als Konservierungsmittel. † QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 28: Einrichtung Des Qiavac 24 Plus Vakuumsystems
Stellen Sie sicher, dass die Säulenerweiterung (EXT), die QIAamp MinElute Säule, der VacConnector (VC) und das VacValve korrekt installiert sind (siehe Abbildung 1). Abbildung 1. Zusammenbau der Komponenten des QIAamp DSP Virus Kit für die Vakuumverarbeitung von Proben 1. VacValve (im Lieferumfang des Vakuumsystems 3. - Seite 29 Abbildung 2. Kennzeichnungsschema für Lyseröhrchen (LT), Elutionsröhrchen (ET) und QIAamp MinElute Säulen zur Verwendung auf dem QIAvac 24 Plus Vakuumsystem QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 30: Protokoll: Isolierung Und Aufreinigung Von Viralen Nukleinsäuren Aus Plasma Und Serum
Stellen Sie einen Heizblock für die Verwendung in den Schritten 4 und 17 auf 56 °C ein. Stellen Sie sicher, dass Waschpuffer 1 (AW1), Waschpuffer 2 (AW2) und QIAGEN Protease (QP) gemäß den Anweisungen unter „Wichtige Hinweise vor Beginn“ auf Seite 22 vorbereitet wurden. - Seite 31 Sie im beiliegenden Handbuch. Verfahren 1. Pipettieren Sie 75 µl QIAGEN Protease (QP) in ein Lyseröhrchen (LT). Überprüfen Sie vor dem Gebrauch das Verfallsdatum der rekonstituierten Protease. 2. Geben Sie 500 µl Plasma- bzw. Serumprobe in das Lyseröhrchen (LT).
- Seite 32 13. Geben Sie 600 µl Waschpuffer 1 (AW1) auf die QIAamp MinElute Säule. Entfernen und entsorgen Sie die Säulenerweiterung (EXT) vorsichtig und schließen Sie das Ventil des Vakuumsystems. Nachdem Waschpuffer 1 (AW1) durch die QIAamp MinElute Säule gesaugt wurde, öffnen Sie das Ventil, um den Unterdruck abzubauen. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
- Seite 33 Sie das Waschröhrchen (WT). Öffnen Sie vorsichtig den Deckel der QIAamp MinElute Säule und geben Sie 20 µl oder 60 µl Elutionspuffer (AVE) (je nach dem nachgelagerten Assay) in die Mitte der Membran. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
- Seite 34 Drehrichtung des Rotors zeigen (wenn sich der Rotor also im Uhrzeigersinn dreht, müssen die Deckel gegen den Uhrzeigersinn zeigen und umgekehrt). Führen Sie nach Abschluss dieses Protokolls die für das Vakuumsystem vorgesehenen Wartungsmaßnahmen durch (weiterführende Hinweise finden Sie im Handbuch des Vakuumsystems). QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 35: Qualitätskontrolle
Qualitätskontrolle Gemäß dem zertifizierten Gesamtqualitätsmanagementsystem von QIAGEN wird jede Charge des QIAamp DSP Virus Kit nach festgelegten Prüfkriterien getestet, um eine einheitliche Produktqualität sicherzustellen. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 36: Grenzen Des Verfahrens
Nukleinsäuren aus menschlichen Plasma- und Serumproben aufgereinigt wurden. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, für jedes Verfahren, das im Labor des Anwenders durchgeführt wird und das nicht durch die Leistungsstudien von QIAGEN abgedeckt ist, die Systemleistung selbst zu verifizieren. -
Seite 37: Leistungsmerkmale
Leistungsmerkmale Die zutreffenden Leistungsmerkmale sind auf der Registerkarte „Resources“ (Ressourcen) der Produktseite auf www.qiagen.com verfügbar. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 38: Hilfe Zur Fehlerbehebung
Questions“ (Häufig gestellte Fragen, FAQ) unseres technischen Support-Centers unter: www.qiagen.com/FAQ/FAQList.aspx. Darüber hinaus stehen Ihnen die Wissenschaftlerinnen und Wissenschaftler beim Technischen Service von QIAGEN stets unterstützend zur Seite, falls Sie Fragen zu den Informationen und/oder Protokollen in diesem Handbuch oder den für die Proben und Assays verwendeten Methoden haben sollten (Kontaktinformationen finden Sie auf www.qiagen.com). - Seite 39 Risiko einer Membranverstopfung zu verringern. Außerdem ist es von entscheidender Bedeutung, dass Sie die Puffer für die Lyse in der oben beschriebenen korrekten Reihenfolge hinzufügen. Die QIAGEN Protease (QP) darf nicht direkt in den Lysepuffer (AL) gegeben werden. Im Lysepuffer hat Lösen Sie diesen durch Inkubation des Lysepuffers (AL) bei 56 °C auf.
- Seite 40 Anweisungen aufgelöst wird. Mischen Sie das Fläschchen durch mehrmaliges Umschwenken, um Schaumbildung zu vermeiden. Stellen Sie sicher, dass die QIAGEN Protease (QP) vollständig gelöst ist. Die QIAGEN Protease (QP) darf nicht direkt in den Lysepuffer (AL) gegeben werden. Zur Gewährleistung einer effizienten Lyse müssen Probe und Lysepuffer (AL) gründlich vermischt werden, sodass eine homogene Lösung entsteht.
- Seite 41 Ermitteln Sie das für Ihre nachgelagerte Anwendung geeignete Maximalvolumen an Elutionsvolumen Eluat. Reduzieren oder erhöhen Sie das in der nachgelagerten Anwendung eingesetzte gewählt Eluatvolumen entsprechend. Das Elutionsvolumen kann proportional angepasst werden. Elution kleineren Volumina Buffer führt höheren Nukleinsäurekonzentrationen. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
- Seite 42 Carrier-RNA kann nur in Buffer AVE gelöst werden; die gelöste Carrier-RNA muss sofort zum Lysepuffer (AL) zugegeben werden. Außerdem können einige interne Kontrollreagenzien nachgelagerten handelsüblichen Assays Carrier-RNA enthalten. In diesen Fällen richten Sie sich bitte nach den relevanten Gebrauchshinweisen des Herstellers des nachgelagerten Assays. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 43: Symbole
Dieses Produkt erfüllt die Anforderungen der europäischen Verordnung 2017/746 über In-vitro-Diagnostika. In-vitro-Diagnostikum Katalognummer Chargenbezeichnung Materialnummer (Kennzeichnung von Komponenten) Komponenten Volumen Enthält Anzahl Internationale Artikelnummer R steht für Revision der Gebrauchsanweisung, n ist die Revisionsnummer Temperaturbegrenzung QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... - Seite 44 Wichtiger Hinweis Nach einem Protokollschritt mit dieser Kennzeichnung die Handschuhe wechseln Bei Lieferung öffnen; QIAamp MinElute Säulen bei 2–8 °C lagern Nach Zugabe von Ethanol in die Flasche das aktuelle Datum notieren ____ Hinzugeben QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
- Seite 45 Symbol Bedeutung des Symbols Lyophilisiert Rekonstituieren in Ethanol Guanidinhydrochlorid Maleinsäure Subtilisin Führt zu Eindeutige Produktidentifizierung QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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Seite 46: Anhang
Latex- oder Vinylhandschuhe, wenn Sie mit Reagenzien oder RNA-Proben arbeiten, um eine RNase-Kontamination über die Hautoberfläche oder durch staubige Laborgeräte zu vermeiden. Wechseln Sie die Einmal-Handschuhe häufig und halten Sie Röhrchen verschlossen. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... -
Seite 47: Bestellinformationen
Ablage, Abfallflaschen, Schläuche, Verbindungsstücke, Ventil, Messgerät und 24 VacValves Aktuelle Lizenzinformationen und produktspezifische Haftungsausschlüsse finden Sie in der Gebrauchsanweisung für das jeweilige QIAGEN Kit. Gebrauchsanweisungen für QIAGEN Kits sind unter www.qiagen.com verfügbar oder können beim Technischen Service von QIAGEN oder Ihrem örtlichen Händler angefordert werden. -
Seite 48: Bearbeitungshistorie Des Dokuments
„Entnahme, Lagerung und Handhabung von Proben“ aktualisiert „Wichtige Hinweise“ und „Verfahren“ aktualisiert „Leistungsmerkmale“ aktualisiert „Anhang“ ergänzt „Hilfe zur Fehlerbehebung“ hinzugefügt Abschnitt „Symbole“ aktualisiert „Bestellinformationen“ ergänzt QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022... - Seite 49 Diese Seite wurde absichtlich leer gelassen. QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...
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- Seite 52 QIAGEN übernimmt für diese Protokolle keine Garantie und garantiert auch nicht, dass sie keine Rechte Dritter verletzen. 2. Über die ausdrücklich erwähnten Lizenzanwendungen hinaus übernimmt QIAGEN keinerlei Garantie dafür, dass dieses Panel und/oder die mit diesem Panel durchgeführte(n) Anwendung(en) die Rechte Dritter nicht verletzen.
- Seite 53 Bestellungen www.qiagen.com/shop | Technischer Support support.qiagen.com | Website www.qiagen.com HB-3032-001 QIAamp DSP Virus Kit Gebrauchsanweisung (Handbuch) 06/2022...