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18. Senken Sie die Filter-Hohlnadeln vorsichtig in die Wells der PCR-
Platte (oder -Streifen), um die Beads mit der immobilisierten
Template-DNA anzusaugen. Halten Sie die Hohlnadeln für 15 s in
Position. Seien Sie vorsichtig, wenn Sie den Saugkopf anheben.
Sepharose-Beads sedimentieren relativ schnell. Falls über 1 Min.
seit dem Schütteln der Platte (oder Streifen) vergangen ist, schütteln Sie sie
erneut für 1 Min., bevor Sie die Beads ansaugen.
19. Überführen Sie den Saugkopf in den Trog mit 70 % Ethanol (Trog 1).
Spülen Sie die Filter-Hohlnadeln für 5 s.
20. Überführen Sie den Saugkopf in den Trog mit PyroMark Denatu-
rierungslösung (Trog 2). Spülen Sie die Filter-Hohlnadeln für 5 s.
21. Überführen Sie den Saugkopf in den Trog mit PyroMark Waschpuffer
(Trog 3). Spülen Sie die Filter-Hohlnadeln für 10 s.
22. Heben Sie den Saugkopf an und schwenken Sie ihn um mehr als 90°
in die Senkrechte, und lassen Sie für 5 s die Flüssigkeit aus den
Filter-Hohlnadeln ablaufen (siehe Abbildung 10).
Abbildung 10. Der Saugkopf um mehr als 90° in die Senkrechte geschwenkt.
23. Schließen Sie den Vakuumschalter am Saugkopf (auf „Off"),
während sie ihn über der PyroMark Q24 Platte halten.
24. Geben Sie die Beads in die Platte mit jeweils 25 µl PyroMark
Annealing-Puffer pro Well ab, indem Sie den Saugkopf vorsichtig hin
und her schütteln. Lassen Sie die Filter-Hohlnadeln auf den Boden
der Wells absetzen.
25. Überführen Sie den Saugkopf in den ersten Trog mit hochreinem
Wasser (Trog 4) und schütteln Sie ihn für 10 s.
26. Spülen Sie die Filter-Hohlnadeln, indem Sie die Hohlnadeln in den
zweiten Trog mit hochreinem Wasser (Trog 5) eintauchen und
Unterdruck anlegen. Spülen Sie die Hohlnadeln mit 70 ml
hochreinem Wasser.
27. Heben Sie den Saugkopf an und schwenken Sie ihn um mehr als 90°
in die Senkrechte, und lassen Sie für 5 s die Flüssigkeit aus den
Filter-Hohlnadeln ablaufen (siehe Abbildung 10).
PyroMark Q24 Control Oligo Handbuch 03/2015
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