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Einleitung
Überblick
Der XF HS Mini Analyzer misst die Änderungsrate der Konzentration an gelöstem Sauerstoff und
des pH-Werts in dem Medium, das die in einer Miniplate kultivierten Lebendzellen direkt umgibt.
Veränderungen im extrazellulären Medium kommen durch einen Verbrauch durch die Zelle oder
die Produktion von Analyten zustande. Eine empfindliche Messung dieser Änderungen im
Medium kann verwendet werden, um auf präzise, nichtinvasive und markierungsfreie Weise die
Raten des Zellmetabolismus zu bestimmen.
Ein einzigartiges Merkmal der XF-Technologie ist ihre Fähigkeit, in lediglich fünf Minuten genaue
und wiederholbare Messungen vorzunehmen. Dies wird erreicht, indem ein äußerst kleines
Volumen (etwa 2 µl) an Medium über dem Zell-Monolayer isoliert wird. Der Zellmetabolismus
verursacht schnelle Veränderungen in der Mikroumgebung dieses kleinen Volumens, die einfach
zu messen sind.
Ein Messzyklus wird in sechs Minuten ausgeführt. Dabei wird das Medium behutsam gemischt
und die Analytkonzentrationen werden gemessen, bis die Sauerstoffkonzentration um etwa 20 bis
30 % sinkt und der pH-Wert des Mediums um etwa 0,1 bis 0,2 pH-Einheiten abfällt. Die Messung
wird mithilfe optischer Fluoreszenz-Biosensoren ausgeführt, die in eine Einweg-Cartridge
integriert sind. Die Cartridge wird in eine 8-Well-Zellkultur-Miniplate gesetzt.
Die Stoffwechselraten bei Basislinie werden in der Regel drei- bis viermal gemessen und in
pmol/min für die Sauerstoff-Verbrauchsrate (OCR) und mpH/min für die extrazelluläre
Azidifizierungsrate (ECAR) ausgegeben. Dann wird dem Medium die Verbindung zugesetzt. Nach
dem Mischen werden wiederholte Messungen von OCR und ECAR nach Behandlung ausgeführt.
Wenn Zellen ihren Stoffwechselweg umstellen, ändert sich auch das Verhältnis zwischen OCR
und ECAR.
Das XF HS Mini Analyzer System umfasst:
•
Benchtop-Analyzer
•
Einweg-Sensor/-Verbindung
•
Zuführkartuschen
•
Für die Gewebekultur vorbehandelte Miniplates zur Aussaat von Zellen für den Assay
•
Kalibrierlösung
•
Seahorse Analytics für die XF-Datenanalyse
Verbrauchsmaterialien sind separat erhältlich. Dazu zählen FluxPaks (Sensor Cartridges,
Zellplatten und Kalibriersubstanz) sowie verschiedene Assay-Kits, Reagenzien und Medien.
Seahorse XFp-Miniplates und XF HS Miniplates sind mit dem XF HS Mini Analyzer kompatibel.
Seahorse XF Miniplates und Sensor Cartridges sind exklusiv bei Agilent erhältlich.
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Seahorse XF HS Mini Extracellular Flux Analyzer Benutzerhandbuch
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