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Geräteübersicht und Einsatzzweck
Der Agilent Seahorse XF Pro Analyzer misst die Änderungsrate der Konzentration
an gelöstem Sauerstoff und des pH-Werts in dem Medium, das die in einer
Mikroplatte kultivierten Lebendzellen direkt umgibt. Veränderungen in den
extrazellulären Medien werden durch den Verbrauch oder die Produktion von
Analyten durch die Zellen verursacht. Daher kann eine empfindliche Messung des
Medienflusses verwendet werden, um auf präzise, nichtinvasive und
markierungsfreie Weise die Raten des Zellmetabolismus zu bestimmen.
Ein einzigartiges Merkmal der Seahorse XF-Technologie ist ihre Fähigkeit, in
lediglich fünf Minuten genaue und wiederholbare Messungen vorzunehmen. Das
Gerät, das mit einer Sensorkartusche arbeitet, isoliert einige µl des Mediums über
dem Zell-Monolayer. Der Zellmetabolismus verursacht schnelle Veränderungen der
„Mikroumgebung" in diesem kleinen Volumen, die leicht zu messen sind.
Eine XF Sensorkartusche wird benötigt, um einen Assay durchzuführen.
Die Kartusche verfügt über 96 Sonden, und jede Sonde hat einen einzelnen
Multifluor-Sensorspot, der sowohl auf die Sauerstoff- als auch auf die
Protonenkonzentration reagiert. Das System misst die Konzentration jedes Analyten
im Zeitverlauf und berechnet automatisch die Sauerstoff-Verbrauchsrate (OCR) und
die Protoneneffluxrate (PER) – ein quantitatives Maß für die extrazelluläre
Azidifizierungsrate (ECAR) – gleichzeitig in jedem Well der Mikroplatte.
Ein Messzyklus wird normalerweise in sechs Minuten ausgeführt. Das Medium
wird vorsichtig gemischt, die Sonde wird 200 µm über dem Well-Boden positioniert
und die Analytkonzentration wird gemessen.
Die Stoffwechselraten bei Basislinie werden in der Regel drei- bis viermal gemessen
und in pmol/min für die Sauerstoffverbrauchsrate (OCR), mpH/min für die
extrazelluläre Azidifizierungsrate (ECAR) und pmol/min für die Protoneneffluxrate
(PER) ausgegeben. Dann werden dem Medium Verbindungen zugesetzt. Nach dem
Mischen werden wiederholte Messungen von OCR und ECAR nach Behandlung
ausgeführt. Wenn Zellen ihren Stoffwechselweg umstellen, ändert sich auch das
Verhältnis zwischen OCR und ECAR/PER.
Das XF Pro System, das einen Bench Top Analyzer und Touchscreen-Controller
umfasst, wird durch die Agilent Seahorse Wave Pro-Software gesteuert. Diese
Software ermöglicht alle Aspekte von Seahorse XF-Assays, einschließlich
Assay-Einrichtung, Gerätesteuerung und Datenanalyse.
Verbrauchsmaterialien sind separat erhältlich. Dazu zählen Agilent Seahorse XF
FluxPaks (einschließlich Sensorkartuschen, Zellplatten und Kalibriersubstanz)
sowie verschiedene Assay-Kits, Reagenzien und Medien. XF Sensorkartuschen sind
spezifisch für den Gerätetyp und ausschließlich bei Agilent erhältlich.
Seahorse XF Pro Analyzer Betriebsanleitung
Einleitung
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