Werbung
1
Einleitung
Geräteübersicht und Einsatzzweck
Geräteübersicht und Einsatzzweck
Der Agilent Seahorse XFe Analyzer misst die Änderungsrate der Konzentration
an gelöstem Sauerstoff und des pH-Werts in dem Medium, das die in einer
Mikroplatte kultivierten Lebendzellen direkt umgibt. Veränderungen in den
extrazellulären Medien werden durch den Verbrauch oder die Produktion von
Analyten durch die Zellen verursacht. Daher kann eine empfindliche Messung
des Medienflusses verwendet werden, um auf präzise, nichtinvasive und
markierungsfreie Weise die Raten des Zellmetabolismus zu bestimmen.
Ein einzigartiges Merkmal der Agilent Seahorse XF-Technologie besteht darin,
dass in lediglich fünf Minuten genaue und wiederholbare Messungen
vorgenommen werden können. Das Gerät, das mit einer Sensorkartusche
arbeitet, isoliert einige µl des Mediums über dem Zell-Monolayer. Der
Zellmetabolismus verursacht schnelle Veränderungen der „Mikroumgebung" in
diesem kleinen Volumen, die leicht zu messen sind.
Die XFe Sensorkartusche wird benötigt, um einen Assay durchzuführen. Die
Kartusche umfasst 24 oder 96 Sonden, und jede Sonde hat einen einzelnen
Multifluor-Sensorspot, der sowohl auf die Sauerstoff- als auch auf die
Protonenkonzentration reagiert. Das System misst die Konzentration jedes
Analyten im Zeitverlauf und berechnet automatisch die
Sauerstoff-Verbrauchsrate (OCR) und die extrazelluläre Azidifizierungsrate
(ECAR) gleichzeitig in allen Wells der Mikroplatte.
Ein Messzyklus wird in der Regel über fünf bis acht Minuten ausgeführt. Das
Medium wird vorsichtig gemischt, die Sonde wird 200 µm über dem Boden des
Wells positioniert, und die Analytkonzentrationen werden gemessen, bis die
Sauerstoffkonzentration um etwa 20–30 % und der pH-Wert des Mediums um
etwa 0,1–0,2 pH-Einheiten abgefallen ist.
Die Basis-Stoffwechselraten werden in der Regel 3- bis 4-mal gemessen und in
pmol/min für die OCR bzw. mpH/min für die ECAR angegeben. Dann wird die
Verbindung dem Medium hinzugegeben, es wird gemischt, und nach der
Behandlung werden die OCR- und ECAR-Messungen durchgeführt und
wiederholt. Wenn Zellen ihren Stoffwechselweg umstellen, ändert sich auch das
Verhältnis zwischen OCR und ECAR.
Das XFe System, das einen Bench Top Analyzer und einen
Touchscreen-Controller umfasst, wird durch die Wave-Software gesteuert. Diese
Software unterstützt alle Aspekte von Seahorse Assays, einschließlich
Assay-Einrichtung, Gerätesteuerung und Datenanalyse.
Verbrauchsmaterialien sind separat erhältlich. Hierzu zählen FluxPaks
(einschließlich Sensorkartuschen, Zellplatten und Kalibriersubstanz) sowie
verschiedene Assay-Kits, Reagenzien und Medien. XFe Sensorkartuschen sind
spezifisch für den Gerätetyp und ausschließlich bei Agilent erhältlich.
12
Seahorse XFe Analyzer Betriebsanleitung
Werbung
