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Biometra TAdvanced
3.2.2
Temperaturgradient
Abb. 4
Wechsel des Thermoblocks
Sobald der Deckel geschlossen wird, bildet sich dank der Gummidichtung am Heizdeckel
ein gekapselter Raum um den Probenblock. Der geschlossene Raum verbessert die Tem-
peraturuniformität des Probenblocks und vermeidet die Bildung von Kondenswasser im
letzten Kühlschritt der PCR. Darüber hinaus sind alle Probenblöcke perfekt abgedichtet,
um das Eindringen von Kondenswasser in die Peltier-Elemente unterhalb des Proben-
blocks und in andere Teile der Elektronik zu verhindern. Die Abdichtung sorgt für den
Schutz der Peltier-Elemente und eine längere Lebensdauer des Geräts.
Die Annealingtemperatur hat großen Einfluss auf die PCR-Reaktion:
¡
Wenn Sie die Annealingtemperatur zu niedrig wählen, können sich die Primer an
nicht vollständig komplementäre Nukleotidsequenzen anlagern. Die Reaktion ver-
läuft weniger spezifisch. Unerwünschte Nebenprodukte werden gebildet.
Wenn Sie die Annealingtemperatur zu hoch wählen, ist die thermische Bewegung
¡
der Primer unter Umständen so groß, dass sie sich nicht richtig anlagern. Es kommt
zu keiner oder nur ineffizienter Produktbildung.
Die optimale Annealingtemperatur liegt etwa 5 ... 10 °C unter der mittleren Schmelz-
temperatur der Primer. Dies entspricht meist einer Temperatur von 55 ... 65 °C.
Mit der optionalen Gradientenfunktion können Sie das Temperaturprogramm für neue
Primerpaare in einem einzigen Lauf optimieren. Dafür legen Sie mit dem Linear Gradi-
ent Tool eine Temperaturdifferenz zwischen den Spalten (Mono-Block) bzw. den Reihen
(Twin-Block) eines Probenblocks fest. Der Temperaturunterschied zwischen den Spalten
bzw. den Reihen ist immer gleich groß.
Funktion und Aufbau
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