Hinzufügen Einer Phix-Kontrolle (Optional); Laden Von Verbrauchsmaterialien In Die Kartusche - illumina iSeq 100 Handbuch

iSeq 100-Sequenziersystem Handbuch
* Beginnen Sie bei nicht aufgeführten Bibliothekstypen, einschließlich anderer Nextera-Bibliotheken, mit einer Ladekonzentration von 50 pM
und optimieren Sie diese im Verlauf der weiteren Läufe.
Diese Tabelle enthält Beispielladekonzentrationen. Das iSeq 100-System ist mit allen Illumina-
Bibliotheksvorbereitungskits (ausgenommen SureCell WTA 3' ) kompatibel. Die optimale
Ladekonzentration kann jedoch variieren.
2 Mischen Sie kurz mit dem Vortexer und zentrifugieren Sie anschließend eine Minute lang bei 280 × g.
3 Lagern Sie verdünnte Bibliotheken bis zur Sequenzierung auf Eis.
Sequenzieren Sie auf die Ladekonzentration verdünnte Bibliotheken am selben Tag.
4 Wenn Sie kein PhiX hinzugeben oder einen Lauf nur mit PhiX durchführen, überspringen Sie den
nächsten Abschnitt und fahren Sie mit
fort.
Hinzufügen einer PhiX-Kontrolle (optional)
PhiX ist eine kleine, gebrauchsfertige Illumina-Bibliothek mit einer ausgewogenen Nukleotidverteilung.
Das Hinzufügen eines PhiX-Spike-ins von 2 % zur Bibliothek liefert zusätzliche Kennzahlen. Für Bibliotheken
mit geringer Varianz wird zur Erhöhung der Basenvarianz ein Spike-in von 5 % empfohlen.
HINWEIS
Bereits ein Spike-in von nur 1 % liefert zusätzliche Kennzahlen, lässt sich jedoch nur schwer pipettieren.
1 Mischen Sie die folgenden Volumina in einem Low-Binding-Röhrchen, um 50 µl 1-nM-PhiX vorzubereiten:
10-nM-PhiX (5 µl)
u
RSB (45 µl)
u
2 Mischen Sie kurz mit dem Vortexer und zentrifugieren Sie anschließend eine Minute lang bei 280 × g.
3 [Optional] Lagern Sie das 1-nM-PhiX maximal einen Monat lang bei -25 °C bis -15 °C.
4 Mischen Sie die folgenden Volumina in einem Low-Binding-Röhrchen, um PhiX auf die Ladekonzentration
der Bibliothek zu verdünnen, z. B.:
PhiX-Ladekonzentration (pM)
50
100
200
5 Verhältnis von PhiX und Bibliothek:
Das Hinzugeben von 2 µl verdünntem PhiX zu 100 µl verdünnter Bibliothek ergibt einen
u
Spike-in von 2 %.
Das Hinzugeben von 5 µl verdünntem PhiX zu 100 µl verdünnter Bibliothek ergibt einen
u
Spike-in von 5 %.
Der tatsächliche PhiX-Prozentsatz ist abhängig von der Qualität und Quantität der Bibliothek.
6 Mischen Sie kurz mit dem Vortexer und zentrifugieren Sie anschließend eine Minute lang bei 280 × g.
7 Lagern Sie die Bibliothek mit dem PhiX-Spike-in auf Eis.

Laden von Verbrauchsmaterialien in die Kartusche

1 [Optional] Wählen Sie Sequence (Sequenzieren), um ein Video mit Anweisungen zum Vorbereiten und
Laden von Kartuschen aufzurufen.
Dokument-Nr. 1000000036024 v04 DEU
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in Diagnoseverfahren.
Laden von Verbrauchsmaterialien in die Kartusche auf Seite 24
Volumen 1-nM-PhiX (µl)
5
10
20
Volumen RSB (µl)
95
90
80
24