remel RapID STR System Bedienungsanleitung Seite 6

FRENCH
PROCÉDURE
Préparation de l'inoculum:
1. Cultiver les organismes à tester en culture pure, effectuer une
coloration de Gram et effectuer un test d'hémolyse avant de les
utiliser dans le système.
Remarque: L'hémolyse est améliorée par une incubation anaérobie
ou entre 5 et 7 % de CO .
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2. Les organismes à tester peuvent être prélevés à partir de milieux de
croissance sur gélose non sélectifs. Les types de milieux suivants
sont recommandés: gélose trypticase soja avec ou sans 5 % de sang
de mouton; gélose nutritive; gélose au chocolat.
Remarques:
•
Les milieux contenant, naturellement ou par supplémentation,
des monosaccharides ou des disaccharides ne sont PAS
RECOMMANDÉS car ils risquent d'inhiber l'activité glycolytique
et de réduire la sélectivité du test.
•
Utiliser de préférence des boîtes de culture âgées de 18 à
24 heures pour la préparation de l'inoculum. Les isolats à
prolifération lente peuvent être testés sur des boîtes de culture
âgées de 48 heures.
•
L'utilisation de milieux autres que ceux recommandés peut nuire
aux performances du test.
3. À l'aide d'un porte-coton ou d'une anse d'inoculation, suspendre une
quantité suffisante de croissance bactérienne prélevée sur la boîte de
culture sur gélose dans le liquide d'inoculation (1 ml) RapID afin
d'obtenir une suspension d'une turbidité comparable à l'échelle de
McFarland n° 1 ou un équivalent.
Remarques:
•
Les suspensions de turbidité nettement inférieure à l'échelle de
McFarland n°1 provoquent des réactions aberrantes.
•
Les suspensions bactériennes d'une turbidité légèrement
supérieure à l'échelle de McFarland n°1 sont sans effet sur les
performances du test et sont recommandées pour les cultures
souches et les souches destinées au contrôle qualité. Cependant,
les suspensions présentant une turbidité très supérieure à
l'échelle de McFarland n°1 nuisent aux performances du test.
•
Mélanger les suspensions de façon homogène en utilisant, le cas
échéant, un agitateur-mélangeur vortex.
•
Les suspensions doivent être utilisées dans les 15 minutes
suivant leur préparation.
4. Prélever éventuellement une pleine anse de la suspension à tester et
inoculer une boîte de culture sur gélose pour en vérifier la pureté et
effectuer tout test supplémentaire, le cas échéant. Mettre la boîte de
culture à incuber pendant 18 à 24 heures entre 35 et 37°C.
Inoculation des plaquettes RapID STR:
1. Retirer la membrane de la plaquette recouvrant le port d'inoculation
en tirant vers le haut et vers la gauche la languette portant la mention
« Peel to Inoculate ».
2. À l'aide d'une pipette, transférer doucement l'intégralité du contenu du
tube de liquide d'inoculation dans l'angle inférieur droit de la
plaquette. Reboucher le port d'inoculation en remettant en place la
languette précédemment retirée.
3. Après avoir ajouté la suspension, tout en maintenant la plaquette en
contact avec une surface plane, écarter la plaquette des cavités
réactives en la plaçant à un angle d'environ 45 degrés (voir ci-
dessous).
4. Alors qu'elle est toujours penchée, agiter doucement la plaquette pour
obtenir une distribution homogène de l'inoculum le long des
déflecteurs arrières, comme sur l'illustration ci-dessous.
5. Tout en stabilisant la plaquette en position horizontale (le plus simple
est de faire reposer le fond des cavités réactives sur la paillasse),
faire basculer doucement la plaquette vers les cavités réactives
jusqu'à ce que l'inoculum s'y écoule depuis les déflecteurs (voir ci-
dessous). Tout l'inoculum doit s'évacuer de la partie arrière de la
plaquette.
6.
Incubation des plaquettes RapID STR:
Mettre à incuber les plaquettes inoculées entre 35 et 37°C dans un
incubateur sans CO
plaquettes peuvent être mises à incuber dans les boîtes d'incubation en
aggloméré fournies avec le kit.
Évaluation des plaquettes RapID STR:
Les plaquettes RapID STR comportent 10 cavités réactives qui, associées
à l'hémolyse, permettent d'enregistrer 15 résultats de tests. Les cavités 7
à 10 sont bifonctionnelles, c'est-à-dire que chacune d'elle peut accueillir
deux tests. Les tests bifonctionnels sont interprétés une première fois
avant l'ajout de réactif, ce qui donne un premier résultat, puis la même
cavité est examinée de nouveau après l'ajout de réactif pour obtenir un
second résultat. Les cavités bifonctionnelles qui nécessitent l'ajout du
réactif RapID STR sont signalées par une barre : le premier test est situé
au-dessus de cette barre et le second en dessous.
N° de cavité
Code du test
1.
2.
3.
4.
Cavités réactives
5.
Conduit d'inoculation
(arrière du plateau)
6.
RÉSULTATS ET PLAGE DES VALEURS ATTENDUES
Le tableau différentiel RapID STR illustre les résultats escomptés pour le
système RapID STR. Les résultats du tableau différentiel sont exprimés
sous la forme d'une série de pourcentages positifs pour le test de chaque
système. Ces informations apportent un soutien statistique à l'utilisation de
chaque test et, par un codage chiffré des résultats de tests numériques,
constituent la base d'une approche probabiliste pour l'identification de
l'isolat à tester.
Les identifications s'effectuent en associant les résultats des tests réalisés
sur les plaquettes RapID STR à d'autres tests de laboratoire (ex.: coloration
de Gram, hémolyse, morphologie de la colonie, croissance en milieu
différentiel ou sélectif) pour définir un profil ressemblant statistiquement à
la réactivité connue de taxons enregistrés dans la base de données du
système RapID. Ces profils sont comparés à l'aide du tableau différentiel
RapID STR ou déterminés à partir d'un microcode et de la liste des codes
RapID STR ou ERIC.
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Remarque: Si le mouvement de basculement de la plaquette est trop
brusque, il se peut que de l'air soit emprisonné au point de jonction de
la cavité de test, d'où une restriction de déplacement du liquide.
Cavités réactives
(avant du plateau)
Remettre la plaquette en position horizontale. Le cas échéant, tapoter
doucement la plaquette sur la paillasse pour évacuer l'air emprisonné
dans les cavités.
Remarques:
•
Vérifier que les cavités sont remplies de façon uniforme, sans
bulles. De très légères irrégularités de remplissage des cavités
sont acceptables et n'affectent pas les performances du test. Si
la plaquette comporte des problèmes de remplissage importants,
elle doit être jetée et une autre plaquette doit être inoculée.
•
Terminer l'inoculation de chaque plaquette destinée à recevoir le
liquide d'inoculation avant d'en inoculer de nouvelles.
•
L'inoculum ne doit pas rester dans la partie arrière de la plaquette
pendant des périodes prolongées avant la fin de la procédure.
pendant 4 heures. Pour faciliter la manipulation, les
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Emplacement de test sur plaquette RapID STR
1 2 3 4 5
ARG ESC MNL SBL RAF
Tout en maintenant fermement la plaquette RapID STR sur la paillasse,
retirer la membrane recouvrant les cavités réactives en tirant vers le
haut et vers la gauche la languette située en bas à droite.
Sans ajouter de réactif, évaluer les résultats des cavités (ARG) à
10 (PO4) de gauche à droite, conformément au guide d'interprétation
du tableau 2. Consigner les résultats dans les cases du formulaire
prévues à cet effet, en utilisant le code indiqué au-dessus de la barre
pour les tests bifonctionnels.
Ajouter deux gouttes de réactif RapID STR dans les cavités 7 (TYR) à
10 (PYR).
Patienter au moins 30 secondes et au plus 3 minutes pour permettre
le développement de la couleur. Évaluer les résultats des cavités 7 à
10. Consigner les résultats dans les cases du formulaire prévues à
cet effet, en utilisant le code indiqué sous la barre pour les tests
bifonctionnels.
Noter la réaction d'hémolyse pour l'isolat testé dans la case prévue à
cet effet sur le formulaire de rapport. La réaction d'hémolyse fait office
ème
de 15 test et doit être notée positive pour les isolats bêta-
hémolytiques uniquement. Les hémolyses alpha et gamma doivent
être notées négatives.
Identifier le microcode obtenu sur le formulaire de rapport à l'aide de
la ERIC.
6 7 8 9 10
INU GAL GLU NAG PO
4
TYR HPR LYS PYR