remel RapID STR System Bedienungsanleitung Seite 18

SPANISH
PROCEDIMIENTO
Preparación del inóculo:
1. Los microorganismos en estudio deben cultivarse en un medio de
cultivo puro, examinarse con la tinción de Gram y someterse a una
prueba de hemólisis antes de usarlos en el sistema.
Nota: La hemólisis se refuerza mediante una incubación anaeróbica
o con CO entre 5% y 7%.
2
2. Los microorganismos estudiados pueden extraerse de medios de
crecimiento no selectivos con agar. Se recomienda usar los
siguientes medios: Agar con tripsina de soja (TSA) con o sin sangre
de oveja al 5%; agar con nutriente; agar achocolatado.
Notas:
•
NO se recomienda usar algunos medios que contienen o se
suplementan con mono o disacáridos, ya que pueden suprimir
la actividad glucolítica y reducir la selectividad de la prueba.
•
Las placas usadas para la preparación del inóculo deben tener
preferentemente de 18 a 24 horas. Los aislamientos de
crecimiento lento se pueden estudiar con placas de 48 horas.
•
El uso de medios distintos de los recomendados puede
comprometer el comportamiento de la prueba.
3. Con una torunda de algodón o un asa de inoculación, suspender
suficiente crecimiento del cultivo en la placa de agar en el líquido de
inoculación RapID (1 ml) para conseguir una turbidez visual igual a
la del estándar de turbidez Nº 1 de McFarland o equivalente.
Notas:
•
Las suspensiones con una turbidez significativamente menor
que el estándar Nº 1 de McFarland provocarán reacciones
anómalas.
•
Las suspensiones bacterianas que son ligeramente más
turbias que el estándar Nº 1 de McFarland no afectarán al
comportamiento de la prueba y se recomiendan para los
cultivos madre y las cepas de control de calidad. No obstante,
las suspensiones preparadas con una turbidez bastante mayor
que el estándar Nº 1 de McFarland comprometerán el
comportamiento de la prueba.
•
Las suspensiones se deben mezclar bien, con vortex si es preciso.
•
Las suspensiones se deben usar en los 15 minutos siguientes
a su preparación.
4. Puede inocularse otra placa de agar para comprobar la pureza y
cualquier otro estudio adicional que pueda ser necesario, usando un
asa llena de la suspensión de prueba del tubo de líquido de
inoculación. Incubar la placa durante un periodo de 18 a 24 horas a
una temperatura de 35 a 37°C.
Inoculación de los paneles RapID STR:
1. Abrir la tapa del panel sobre el acceso de inoculación, tirando de la
pestaña marcada "Peel to Inoculate" hacia arriba y hacia la izquierda.
2. Con una pipeta, transferir suavemente el contenido de todo el tubo
de líquido de inoculación a la esquina superior derecha del panel.
Volver a sellar el acceso de inoculación del panel, presionando la
pestaña de apertura para que vuelva a su posición original.
3. Después de añadir la suspensión de prueba, y mientras se mantiene
el panel sobre una superficie nivelada, inclinar el panel hacia el lado
contrario a los pocillos de reacción, aproximadamente en un ángulo
de 45º (ver la siguiente imagen).
4. Mientras se inclina, debe mecerse suavemente el panel de lado a
lado para distribuir homogéneamente el inóculo a lo largo de las
depresiones posteriores, como se muestra en la imagen.
5. Mientras se mantiene en posición horizontal nivelada (que se
consigue mejor usando la parte superior de la mesa de trabajo
contra el fondo de los pocillos), debe inclinarse lentamente el panel
hacia delante, hacia los pocillos de reacción, hasta que el inóculo
fluya a lo largo de las depresiones de los pocillos de reacción (ver
más adelante). De esta manera, todo el inóculo de la parte posterior
del panel será evacuado.
Nota: Si se inclina demasiado el panel, puede quedar aire atrapado en
la unión de los pocillos de prueba y limitar el movimiento del líquido.
6.
Incubación de los paneles RapID STR:
Incubar los paneles inoculados a una temperatura de 35 a 37°C en una
incubadora sin CO
paneles se pueden incubar en las bandejas de incubación de cartón que
se incluyen en el estuche.
Puntuación de los paneles RapID STR:
Los paneles RapID STR contienen 10 pocillos de reacción que, además
de la hemólisis, proporcionan 15 puntuaciones de prueba. Los pocillos de
prueba del 7 al 10 son bifuncionales y contienen dos pruebas independientes
en el mismo pocillo. Las pruebas bifuncionales se puntúan primero antes de
añadir el reactivo que da el primer resultado de la prueba. A continuación,
se vuelve a puntuar el mismo pocillo después de añadir el reactivo que da
el segundo resultado de la prueba. Los pocillos de prueba bifuncionales
que requieren reactivo RapID STR están marcados con la primera prueba
por encima de la barra y la segunda prueba por debajo de la barra.
Nº de pocillo
Código de la
prueba
1.
2.
3.
4.
Pocillos de reacción
5.
Cubeta de inoculación
(parte posterior de la bandeja)
6.
RESULTADOS E INTERVALO DE VALORES ESPERADOS
El diagrama diferencial RapID STR ilustra los resultados esperados con el
sistema RapID STR. Los resultados del diagrama diferencial se expresan
como una serie de porcentajes que indican positivos para cada prueba
del sistema. Esta información apoya estadísticamente el uso de cada
prueba y proporciona la base del enfoque probabilístico para identificar el
aislamiento en estudio, mediante un código numérico de los resultados de
la prueba digital.
Las identificaciones se hacen con las puntuaciones individuales de la
prueba en los paneles RapID STR junto con otra información de laboratorio
(como tinción de Gram, hemólisis, morfología colonial, crecimiento en un
medio diferencial o selectivo) para producir un patrón que imite
estadísticamente la reactividad conocida de los géneros registrados en la
base de datos RapID. Estos patrones se comparan mediante el diagrama
diferencial RapID STR o a partir de un microcódigo y el uso del ERIC.
2
Pocillos de reacción
(Parte delantera de la bandeja)
Devolver el panel a su posición nivelada. Si es necesario, dar unos
golpes suaves con el panel sobre la mesa para eliminar el aire
atrapado en los pocillos.
Notas:
•
Examinar los pocillos de prueba. No deben presentar burbujas y
deben estar uniformemente
irregularidades en el llenado de los pocillos de prueba. No
afectarán a su comportamiento. Si el panel está claramente mal
llenado, se debe inocular un nuevo panel y desecharse el erróneo.
•
Completar la inoculación de cada panel que reciba el líquido de
inoculación antes de inocular nuevos paneles.
•
No dejar que el inóculo repose en la parte posterior del panel
durante mucho tiempo sin completar el procedimiento.
durante 4 horas. Para facilitar la manipulación, los
2
Situación en el panel de prueba RapID STR
1 2 3 4
ARG ESC MNL SBL
Mientras se sujeta firmemente el panel RapID STR sobre la mesa,
retirar la tapa que cubre los pocillos de reacción. Para ello, tirar de la
pestaña inferior derecha hacia arriba y hacia la izquierda.
Sin añadir el reactivo, leer y puntuar los pocillos del 1 (ARG) al 10 (PO
de izquierda a derecha, usando la guía de interpretación que se
incluye en la Tabla 2. Registrar las puntuaciones de las pruebas en los
recuadros adecuados del formulario de resultados, usando el código de
prueba que se encuentra encima de la barra para pruebas bifuncionales.
Añadir 2 gotas del reactivo RapID STR a los pocillos del 7 (TYR) al
10 (PYR).
Dejar 30 segundos como mínimo o 3 minutos como máximo para
que se desarrolle el color. Leer y puntuar los pocillos del 7 al 10.
Anotar las puntuaciones en los recuadros adecuados del formulario
de resultados, usando los códigos de prueba que se encuentran
debajo de la barra para pruebas bifuncionales.
Anotar la reacción de hemólisis del aislamiento en estudio en el
recuadro adecuado del formulario de resultados. La reacción de
hemólisis es la prueba número 15 y debe puntuarse como positiva
sólo en los aislamientos beta-hemolíticos. Las hemólisis alfa y
gamma se puntuarán como negativos.
Consultar el microcódigo obtenido en de resultados de ERIC para la
identificación.
llenos. Se aceptan ligeras
5 6 7 8 9 10
RAF INU GAL GLU NAG PO
TYR HPR LYS PYR
4
)
4