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4. Fehlerbehebung
Problem
Unvollständige Übertragung
Leere oder schwache Gebiete
auf der Membran
Moleküle wandern nicht aus Gel
•
p14
Lösung
Entfernen Sie Lufteinschlüsse zwischen dem Gel und
Membran während der Montage-Stack.
S-Puffer mit einer geringeren Ionenstärke.
Alle elektrischen Anschlüsse prüfen. Bestätigen Sie,
dass Strom durch den Transfer Stapel fließt.
Prüfen, ob der Puffer pH-Wert nahe dem pH-Wert
bestimmt. Die meisten Puffer sollten nicht titriert
werden. Machen Sie frischen Puffer.
Verwenden 3,5 mM SDS (0,1%) in den
Übertragungspuffer.
Hinzufügen mehrere Blätter Puffer-gesättigtem
Löschpapier jeder Seite des Gels, so dass mehr
Sandwich-Puffer vorliegt während der Übertragung.
Erhöhen Sie die Transferperiode. Große Fragmente
können eine zusätzliche Stunde.
Verwenden Sie keine Färbung oder Fixiermittel auf
das Gel vor dem Transfer.
Verwenden Sie eine dünnere Gel.
Reduzieren Sie die Gel-Acrylamid-Konzentration.
Bei Verwendung eines nicht-Nitrozellulosemembran,
einschließlich Methanol im Transferpuffer vermeiden
oder reduzieren Sie die Menge so gering wie möglich.
Verwenden Sie analysenreine Reagenzien.
Erhöhung der Nettoladung des Proteins unter
Verwendung eines Transfer-Puffer mit einem anderen
pH-Wert. Niedrigeren pH-Wert (<6-7) erhöht die posi-
tive Ladung auf Proteine , höheren pH (>6-7) erhöht
die negative Ladung auf Proteine .
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