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Anmerkung: Um die
Spannungsgradienten
berechnen, teilen die
Spannungseinstellung durch
den Abstand zwischen den
Elektroden (12,7 cm).
p8
•
Schnell, Hochspannungs-Läufe
Bestimmte Anwendungen, wie zB Screening Proben
oder Prüfen Reinheit der Probe, schnell unter Hoch-
spannung Bedingungen durchgeführt werden. Kühlen
Sie die Basis (-20 °C) und begrenzen die Laufzeit bis
5 Minuten oder weniger bei 500 V.
Langsamer läuft niedrigerer Spannung
Ein Spannungsgradient von 12 V/cm (150 V) trennt
0,1 bis 23 kb Fragmente einer Hind III-Verdau von
λ-DNA in 30 bis 40 Minuten (unter Verwendung von
1% Agarosegel und 0,5 X TBE-Laufpuffer). Alternativ,
mit den gleichen Lösungen, könnte in diesem Beispiel
bei 24 V/cm (300 V) mit akzeptablen Band Auflösung
in 20 bis 30 Minuten ausgeführt werden. Kühlen Sie
den Boden vor dem Gebrauch.
Tabelle 1: Spannung Einstellungen und empfohlene
Einstellungen Lauf
Spannung
Gradient
(V)
(V/cm)
500
40
400
31
300
24
200
16
150
12
* F ür eine schnelle Läufe von 20 Minuten oder weniger,
verwenden 0,5 X TBE und chillen die Basis zu -20 °C vor
dem Gebrauch.
†
Spannung und Zeiten sind für 1% Agarose NA, 0,5 X TBE
und ein gekühltes Basis.
Nach der Trennung
Wichtig! Schalten Sie die Stromversorgung, trennen
Sie die Leitungen, und den Deckel abnehmen.
Wenn kein Ethidiumbromid zu dem Gel oder der
Probe vor dem Lauf aufgenommen, Beize das Gel in
eine Lösung von 0,5 bis 1,0 µg/ml Ethidiumbromid in
Wasser oder Puffer.
Reinigen Sie das Gerät wie unten beschrieben.
†
Zeit
(min)
5*
10*
20*
30 zu 40
30 zu 60
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