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Positionierung zum Trennen der Stromversorgung
Das Gerät sollte immer so aufgestellt werden, dass der Bediener freien Zugang zum Netzschalter hat.
Messeinheit
Prinzip der zeitaufgelösten Fluorometrie
Bei der herkömmlichen Fluoreszenzanalyse wird ein Photonenstrahl auf eine Probe gerichtet. Die fluoreszierenden
Verbindungen absorbieren Energie aus dem einfallenden Licht. Die angeregten Verbindungen kehren durch Emission
von Photonen in ihren Grundzustand zurück. Diese Photonen haben eine größere Wellenlänge als das Anregungslicht.
Fluoreszierende Verbindungen können auf ähnliche Weise wie Radioisotope in Radioimmunassays als Marker
verwendet werden. Die Sensitivität herkömmlicher fluoreszierender Sonden ist jedoch erheblich reduziert, da hier
Interferenzen der Hintergrundfluoreszenz aufgrund verschiedener Verbindungen in biologischem Material zum Tragen
kommen.
Bei der zeitaufgelösten Fluorometrie wird das Problem der geringen Sensitivität durch Messung der langsamen
Fluoreszenzabnahme von Lanthanoid-Chelat-Markern wie z. B. Europium umgangen (Kurve 1 in
Fluoreszenzabklingkurven
Ursprungs (Kurve 2) stört die Messung der weitaus langsameren Fluoreszenzabnahme der Lanthanoid-Marker nicht, da
die Abklingzeiten der Fluorophore im Bereich von 1‑20 Nanosekunden liegen, im Vergleich zu den deutlich längeren
Abklingzeiten der Lanthanoid-Marker im Bereich von 10‑1000 Mikrosekunden. Die Sensitivität von Fluorometern, die
nach dem Prinzip der zeitaufgelösten Fluorometrie mit Lanthanoid-Chelaten als Marker arbeiten, ist aus diesem Grund
um ein Vielfaches besser als die von herkömmlichen Geräten.
Abbildung 19: Fluoreszenzabklingkurven
Zeitaufgelöstes Fluorometer
Der Plattenprozessor verfügt über ein zeitaufgelöstes Fluorometer zur Messung der Fluoreszenz eines Markers. Das
Fluorometer kann drei verschiedene Lanthanoide – Europium, Samarium und Terbium – in derselben Platte messen.
Jede Platte wird einzeln vom Hebewerk in das Fluorometer geladen. Anschließend wird die Platte in die Messposition
überführt. Dort wird jedes Well dem gepulsten Anregungslicht aus der Xenon-Blitzlampe ausgesetzt.
Der Anregungsstrahl wird mithilfe einer optischen Einheit aus drei Quarz-Linsen und zwei Filtern auf die Probe
fokussiert. Der erste Filter (Nr. 2 in
Cutoff-Wellenlänge von 320 nm und filtert das UV-Licht heraus, um bei der Messung von Eu- oder Sm-Markern den
Hintergrund zu reduzieren. Wird ein Lanthanoid mit einer kürzeren Anregungs-Wellenlänge, wie z. B. Terbium, als
Marker verwendet, kann der Filter mithilfe eines Schrittmotors aus dem Lichtweg entfernt werden.
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AutoDELFIA
Gerätehandbuch
Beschreibung der Funktionen
auf Seite 24). Der schnell abnehmende Hintergrund der Fluorophore biologischen
Abbildung 20: Optisches System des Fluorometers
24
Abbildung 19:
auf Seite 25) hat eine
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