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Fluoreszenz
12.10 Protokoll für die Färbung von EVs mit Cell Mask Deep Red (CMDR)
für 640nm Laser
1. Benötigtes Material
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0,5 - 10 µl und 100 - 1000 µl Pipette einschließlich entsprechender Pipetten-
spitzen
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Lyophilisierte oder frische EVs
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1 µL Aliquot CMDR
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Praktisch partikelfreies PBS oder anderer geeigneter Puffer
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Zentrifuge und Vortexer
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Handschuhe
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1,5ml Reaktionsgefäße ("Eppis")
2. Kontrollmessung im Streulichtmodus
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Rekonstituierte EVs sollten um einen Faktor von 1:1000 bis 1:5000 verdünnt
werden. Zum Beispiel können Sie mit der Verdünnung von 1 µl rekonstituierten
EVs in 999 µl PBS beginnen
-
Messen Sie diese Verdünnung im Streulichtmodus
(Sensitivity: 80 - 85; Shutter: 100 - 150, Min Brightness: 30; Min Area: 10;
Max Area: 1000)
Oder verwenden Sie eine vordefinierte SOP
3. Färben der EVs mit CMDR
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Verdünnen Sie CMDR 1:100 vor: Zu 1µL CMDR fügen Sie 99µL PBS hinzu.
4. Fluoreszenz-Messung von gefärbten EVs
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Messung im Fluoreszenzmodus im ZetaView®
Sensitivity: 85 - 95; Shutter: 100 - 150, Min Brightness: 30; Min Area: 10;
Max Area: 1000), oder verwenden Sie eine vordefinierte SOP
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