Manuelle Methode - Particle Metrix Zetaview Pmx-120 Bedienungsanleitung
Nanopartikel tracking analysatoren
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Fluoreszenz
12.5.3 Manuelle Methode
Für eine vollständige Response-Kurve wird an dieser Stelle ein Beispiel für die
Bestimmung des Korrekturfaktors im Fluoreszenzmodus gezeigt. Die Bestimmung
erfolgt mit YG-488 Polystyrol-Fluoreszenzstandardpartikeln. Das folgende Beispiel
wurde mit einem ZetaView®-Gerät durchgeführt, das mit einem 488nm-Laser
ausgestattet war.
In der folgenden Tabelle stellt Δs die Delta-Empfindlichkeit, d.h. den Unterschied der
Empfindlichkeit im Streu- und Fluoreszenzmodus dar. n steht für die Anzahl der
detektierten Partikel (ausgelesen aus der ZetaView®-Software). Der Mittelwert, die
Standardabweichung und die relative Standardabweichung werden aus drei
Wiederholungen berechnet. Stellen Sie sicher, dass die relative Standardabweichung
weniger als 15% beträgt. Wenn die Daten eine größere Varianz aufweisen, sollten
Ausreißer entfernt und Messungen wiederholt werden. Schließlich wird der
Korrekturfaktor für den Fluoreszenzmodus durch das Verhältnis der Anzahl der
detektierten Teilchen im Streulichtmodus n(S) und im Fluoreszenzmodus n(F)
berechnet.
Die folgende Tabelle enthält Daten aus einer typischen Kalibrierung. Im Idealfall sollten
Messungen zu einer Delta-Empfindlichkeit von 16 führen. Dann ist die Geräteleistung
im Streulicht- und im Fluoreszenzmodus gleich. Falls eine Delta-Empfindlichkeit von
16 nicht erreicht wird, kann durch Reduzierung der Empfindlichkeit evtl. störende
Hintergrundstreuung o.ä. verringert werden. Korrigieren Sie die Konzentration mit Hilfe
des Korrekturfaktors für die von Ihnen gemessene Delta-Empfindlichkeit. Bei gleicher
Geräteleistung beträgt die Delta-Empfindlichkeit typischerweise 15 ± 5.
Bitte beachten Sie: Der Korrekturfaktor ist eine Funktion der Delta-Empfindlichkeit. Der
Korrekturfaktor ist unabhängig von der von Ihnen bestimmten Empfindlichkeit. Bei
extrazellulären Vesikeln liegt die empfohlene Empfindlichkeit für Messungen im
Streulichtmodus s(S) bei ca. 80 und im Fluoreszenzmodus s(F) bei ca. 95.
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