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14.
Vermeidung mikrobieller Kontamination
Die wichtigsten mikrobiologischen Kontaminationen in Zell- und Gewebekulturen werden durch Bakterien,
Pilze, Hefen, Mykoplasmen und Viren verursacht. Dieses Kapitel gibt einen Überblick über potentielle
Kontaminationsquellen und über Vorkehrungen und Gegenmaßnahmen.
14.1 Zellen und Medien
• Primärkulturen vom Originalgewebe: Überwachung und Routinetesten der Kulturen.
• Zellen / Zelllinien unbekannter Herkunft oder von Zellbanken: Nur Zellen bekannter und geprüfter Her-
kunft verwenden. Überwachung und Routinetesten neuer Kulturen.
• Medien und Seren: Nur Seren bekannter und geprüfter Herkunft verwenden (Mykoplasmen freie Se-
ren, z.B. UV oder γ bestrahlt).
• Virussuspensionen, Antikörper-Lösungen etc.: Nur Substanzen bekannter und geprüfter Herkunft ver-
wenden.
• Laborgeräte, Medien, Reagenzien, die in Kontakt mit möglicherweise kontaminierten Kulturen waren,
sterilisieren / autoklavieren / entsorgen.
• Antibiotikaeinsatz im Zellkulturmedium kann Entdecken von Bakterien verhindern: Antibiotika gezielt
und sparsam einsetzen.
14.2 Laborausstattung und Umgebung des CO
Kontaminationsquellen im Zellkulturlabor sind Keime aus der Raumluft, Laborgeräte, bauliche Gegeben-
heiten und das Laborpersonal.
• Pipetten und Instrumente nach dem Autoklavieren steril aufbewahren.
• Sterile Werkbank (Laminar Flow Bench): Möglichst wenige Gegenstände außer Absauger und Bren-
ner, Arbeitsmaterialien leicht erreichbar und getrennt voneinander positionieren, Desinfektion der
Oberfläche mit Alkohollösung vor und nach Benutzung, Reinigung unterhalb der Werkbank, regelmä-
ßige Sterilitätstests der Filter.
• Regelmäßige Reinigung / Desinfektion von Laborgeräten wie Zentrifuge, Mikroskop, Wasserbad,
Kühlschrank, sowie des Telefons.
• Keine Aufstellung von Geräten auf dem Boden.
• Raue oder feuchte Wände sind ungeeignet.
• Undichte Türen und Fenster abdichten.
• Klimaanlage mit speziellen Filtern ausstatten.
• Reduzierung der Anzahl der Personen und deren Bewegung im Labor, verursacht durch unspezifische
Anwendungen und Entfernung zu benötigten Geräten, durch kurze Wege und gute Organisation. Die
Aufstellung des CO
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• Regelmäßige mikrobiologische Überwachung des Zellkulturlabors.
14.3 Arbeiten und Verhaltensweisen im Labor
Kontaminationsquellen bestehen durch das Laborpersonal selbst (anhaftende Keime, Tröpfchenübertra-
gung der Mundflora) und den Umgang mit den Geräten und Kulturen. Wir empfehlen Mitarbeitertraining in
aseptischen Techniken, Laborsicherheit und Guter Laborpraxis (GLP).
C (E3) 07/2017
-Inkubators nahe der sterilen Werkbank ist sinnvoll.
-Inkubators
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