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Carl Zeiss
4.12.5
Auflicht - Fluoreszenz
Die Auflicht-Fluoreszenzmethode ermöglicht es, fluoreszierende Substanzen kontrastreich in typischen
Fluoreszenzfarben darzustellen. Im Auflicht-Fluoreszenzmikroskop gelangt das von einer leistungsfähigen
Leuchte erzeugte Licht über ein Wärmeschutzfilter auf das Anregungsfilter. Die gefilterte kurzwellige
Anregungsstrahlung wird von einem dichroitischen Strahlenteiler reflektiert und über das Objektiv auf das
Objekt fokussiert. Das Objekt absorbiert die kurzwellige Strahlung und emittiert anschließend
längerwellige Fluoreszenzstrahlung (Stoke'sches Gesetz), die nun abbildungsseitig vom Objektiv erfasst
und vom dichroitischen Strahlenteiler durchgelassen wird. Schließlich gelangen die Strahlen durch ein
Sperrfilter, welches nur die vom Objekt emittierte langwellige Strahlung passieren lässt.
Anregungs- und Sperrfilter müssen spektral sehr genau aufeinander abgestimmt sein und befinden sich
gemeinsam mit dem zugehörigen dichroitischen Strahlenteiler in einem Reflektormodul FL P&C.
Voraussetzungen
− Stativ Axio Vert.A1 FL oder Axio Vert.A1 mit Leuchte HBO / HXP
oder
− Stativ Axio Vert.A1 FL-LED mit montierten LED-Modulen
− Das Mikroskop ist entsprechend Kapitel 3 ordnungsgemäß in Betrieb genommen und eingeschaltet
− Hellfeldobjektive
− Reflektormodul FL P&C im Reflektorrevolver
− Leuchten für Fluoreszenz (HBO 50, HBO 100, Colibri 2, HXP 120 C)
− Die Leuchten HBO 50 bzw. HBO 100 sind vor der Benutzung gemäß Abschnitt 3.1.11.2 bzw. 3.1.11.3
zu justieren und ca. 15 min. warmlaufen zu lassen
− Leuchte HAL oder Leuchte LED für Durchlichtbeleuchtung
Fluoreszenz einstellen
•
Objektstelle im Durchlicht-Hellfeld oder Phasenkontrast auswählen, dazu Reflektorrevolver
(Bild 4-17/4) in freien Durchgang schalten, am Kondensor (Bild 4-17/2) die Position für Hellfeld bzw.
Phasenkontrast einstellen.
Fluoreszenzbeleuchtung, z. B. Leuchte HBO 50 (Bild 4-17/3) über Vorschaltgerät (Bild 4-17/7),
•
einschalten.
•
Lichtweg mit Shutter Auflicht (Bild 2-7/25) zunächst noch versperren.
Nach Objektstellenwahl die Durchlichtbeleuchtung (Bild 4-17/1) mit der on/off-Funktion (Bild 4-17/5
•
und 6) abschalten.
Bei Benutzung des Stativs Axio Vert.A1 FL-LED kann am Umschalter TL/RL (Bild 2-8/20) direkt
zwischen Durchlicht und Auflicht umgeschaltet werden.
Mit Reflektorrevolver (Bild 4-17/4) den gewünschten Filtersatz einschwenken und mit Shutter Auflicht
•
(Bild 2-7/25) Lichtweg freigeben.
•
Leuchtfeldblende (Bild 4-17/10) so weit schließen, dass sie im Bild sichtbar ist, über Zentrierschrauben
mittig stellen und bis zum Sehfeldrand öffnen.
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BEDIENUNG
Beleuchtungs- und Kontrastverfahren im Auflicht
431030-7044-000
Axio Vert.A1
05/2012
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