Verdünnen Der Bibliothek Auf 1 Nm; Verdünnen Der 1-Nm-Bibliothek Auf Ladekonzentration; Hinzufügen Einer Phix-Kontrolle (Optional) - illumina iSeq-100 Sequenzierungssystem Handbuch

iSeq 100-Sequenzierungssystem Handbuch
Verdünnen der Bibliothek auf 1 nM
1 Nehmen Sie den Resuspension Buffer (Resuspensionspuffer, RSB) aus dem -25 °C bis -15 °C kalten
Lagerort heraus.
Anstelle von RSB können Sie auch 10 mM Tris-HCl, pH 8,5 verwenden.
2 Lassen Sie das Reagenz 10 Minuten lang bei Raumtemperatur auftauen.
3 Je nach Anfangskonzentration der Bibliothek mischen Sie die folgenden Volumina in einem
Mikrozentrifugenröhrchen, um 30 µl einer auf 1 nM verdünnten Bibliothek vorzubereiten:
Anfangskonzentration der Bibliothek (nM)
2
4
10
Die Anfangskonzentrationen können variieren. In der Tabelle sind Beispielvolumina für gängige
Konzentrationen aufgeführt, sodass Sie diese nach Bedarf skalieren können.
4 Mischen Sie kurz mit dem Vortexer und zentrifugieren Sie anschließend eine Minute lang bei 280 × g.
5 [Optional] Lagern Sie die auf 1 nM verdünnte Bibliothek maximal einen Monat lang bei -25 °C bis -15 °C.
Verdünnen der 1-nM-Bibliothek auf Ladekonzentration
1 Mischen Sie die folgenden Volumina in einem Mikrozentrifugenröhrchen, um 100 µl einer auf die
entsprechende Ladekonzentration verdünnten Bibliothek vorzubereiten:
Bibliothekstyp
AmpliSeq für Illumina Library PLUS
NexteraDNA Flex
Die optimale Ladekonzentration variiert je nach Bibliothekstyp. Die Tabelle enthält
Ladekonzentrationsbeispiele für ausgewählte Bibliotheken. Das iSeq 100-System ist mit allen
Bibliotheksvorbereitungs-Kits von Illumina kompatibel.
2 Mischen Sie kurz mit dem Vortexer und zentrifugieren Sie anschließend eine Minute lang bei 280 × g.
3 Legen Sie die 50-pM- bzw. 250-pM-Bibliothek auf Eis für die Sequenzierung.
HINWEIS
Bibliotheken, die auf eine Ladekonzentration verdünnt sind, können nicht langfristig gelagert werden.
4 Fahren Sie mit den nachfolgenden Schritten fort.
Wenn Sie PhiX hinzufügen, befolgen Sie die Anweisungen unter
u
(optional) auf Seite
Wenn Sie keine PhiX-Kontrolle hinzufügen möchten, führen Sie die unter
u
Verbrauchsmaterialien in die Kartusche auf Seite 22
Hinzufügen einer PhiX-Kontrolle (optional)
Fügen Sie PhiX der Bibliothek hinzu, um zusätzliche Metriken, Basendiversität oder eine positive
Kontrollprobe bereitzustellen.
Dokument-Nr. 1000000036024 v00 DEU
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in Diagnoseverfahren.
Ladekonzentration
(pM)
50
250
21.
Volumen Bibliothek (µl)
15
10
7
Volumen 1-nM-Bibliothek
(µl)
5
25
Hinzufügen einer PhiX-Kontrolle
Laden von
beschriebenen Schritte durch.
Volumen RSB (µl)
15
20
23
Volumen RSB
(µl)
95
75
21