Sample Retention Pedestal Measurements - Thermo NanoDrop 2000 Kurzanleitung

Section 1-Introduction

Sample Retention Pedestal Measurements

Eine 1 - 2 µL große Probe wird auf die untere Messungsoberfläche des Geräts pipettiert. Kleinere Probe, von
lediglich 0,5 µL Volumen, können für Nucleinsäuren und Protein A280 Proben genutzt werden.
Ein optisches Lichtleiterkabel (die Empfangsfaser) ist in die untere Messoberfläche integriert. Ein zweites optisches
Fasernkabel (die absendende Faser) wird mit der flüssigen Probe in Berührung gebracht, sodass die Flüssigkeit
den Abstand zwischen den zwei Enden der Fasern durch eine Flüssigkeitssäule überbrückt. Während der Messung
werden durch eine Xenon Blitzlichtlampe Lichtblitze durch die Probe geschickt, die anschließend durch ein
Spektralphotometer verwessen wird. Anschließend werden die generierten Daten durch eine Computer
basierenden Software verrechnet und die Daten in workbook files (*.twbk) auf dem Computer abgespeichert.
Pedestal Sample Size Requirements
Obwohl das Volumen der Probe nicht entscheidend ist, ist es wichtig, dass eine Flüssigkeitssäule, beim Gebrauch
des Mikrovolumenmessplatzes gebildet wird, damit die Weglänge zwischen der oberen und unteren Lichtleiter
überbrückt ist.
Der entscheidende Faktor für die Oberflächenspannung des Tropfens, sind die Wasserstoffbrückenbindung der
Wassermoleküle in der Lösung. Grundsätzlich können alle Zusatzstoffe (einschließlich Proteine, DNA, RNA, Puffer
Salze und Detergenzien) die Oberflächenspannung reduzieren. Obwohl ein 1 µL Volumen für die meisten
Probenmessungen ausreichend ist, gewährleistet eine Erhöhung auf 2 µL Volumen, eine exakte Säulenbildung der
Proben mit reduzierter Oberflächenspannung.
Die Erfahrung zeigt, dass die folgenden Volumen ausreichen, um eine hohe Reproduzierbarkeit der Daten zu
garantieren:
Nukleinsäuren in flüssiger Lösung: 1 µL
Aufgereinigte Proteine: 2 µL
Bradford, BCA, Lowry und Protein Pierce 660 nm Assays: 2 µL
Zellsuspensionen: 2 µL
Es wird empfohlen eine Präzisions-Pipette mit Präzisionsspitzen zu verwenden, um zu gewährleisten, dass
ausreichend Probe (1-2 µL) abgegeben wird. Andere Pipetten (0-10 µl und größer) sind nicht so gut für die Abgabe
von 1 µL großen Volumen geeignet. Falls Sie unsicher über die Eigenschaften der Probe oder der Genauigkeit der
Pipette sind, wird eine Probe mit 2 µL Volumen empfohlen.
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