Making Nucleic Acid Measurements ( Nucleinsäuremessungen Durchführen) - Thermo NanoDrop 2000 Kurzanleitung

•
Type – eine Aufklappliste, aus der die Art der Nucleinsäure, die gemessen wird, auswählt werden kann. Die
Optionen beinhalten DNA-50 für dsDNA, RNA-40 für RNA und ssDNA-33 für Einzelstrang-DNA. Zusätzlich
steht die Optionen Oligo DNA und Oligo RNA zur Verfügung, bei denen ausgehend von der
benutzerdefinierte Basensequenzen der Extinktionskoeffizient berechnet wir. Die kundenspezifische Option
erlaubt dem Benutzer einen Extinktionskoeffizienten zwischen 15 und 150 einzugeben.
•
Conc –Konzentrationen basierend auf den Absorptionskoeffizienten von 260 nm und den Standard oder
benutzerdefinierten Extinktionskoeffizienten. Konzentrationseinheiten können von der danebenliegenden
Auswahlfeld ausgewählt werden. Siehe "Nucleic Acid Calculations" für mehr Details.
•
A260 – zeigt den Absorptionskoeffizienten bei 260 nm, auf eine 10 mm Schichtdicke genormt.
•
A280 - zeigt den Absorptionskoeffizienten bei 280 nm, auf eine 10 mm Schichtdicke genormt.
•
260/280 - Verhältnis des Absorptionskoeffizienten bei 260 zu 280 nm. Das Verhältnis des
Absorptionskoeffizienten bei 260 und 280 nm wird verwendet, um den Reinheitsgrad der DNA und RNA zu
beurteilen. Ein Verhältnis von ~ 1,8 wird in der Regel als "rein" für DNA angesehen; ein Verhältnis von ~ 2,0
wird in der Regel als "rein" für RNA angesehen. Ist das Verhältnis in jedem Fall deutlich niedriger, kann dies
auf das Vorhandensein von Protein-, Phenol-oder andere Verunreinigungen, die stark absorbieren, bei oder
nahe 280 nm, hindeuten.
•
260/230 – Verhältnis des Absorptionskoeffizienten bei 260 zu 230 nm. Die Werte für „reine" Nucleinsäure
bei einer Messung von 260/230 nm sind meistens höher als entsprechende Werte einer Messung von
260/280 nm. Die Werte liegen gewöhnlich 1,8 - 2,2. Falls das Verhältnis deutlich niedriger ist, kann dies auf
das Vorhandensein von Verunreinigungen hindeuten.
•
Baseline correction – falls ausgewählt, ist die Standardwellenlänge für Normalisierungen, 340 nm. Der
Benutzer kann manuell eine andere Wellenlänge für die Normalisierung der Daten eingeben. In diesem Fall
wird Grundlinie automatisch auf den Absorpationkoeffizientenwert bei der ausgewählen Wellenlänge
eingestellt. Alle angegebenen Wellenlängendaten beziehen sich auf diese Werte.
Hinweis: Falls eine Grunlinienkorrektur nicht ausgewählt wurde, kann die Bandbreite/ Spektren von der
Grundlinie abgesetzt sein und die berechnete Konzentration ändert sich dementsprechend.
Making Nucleic Acid Measurements ( Nucleinsäuremessungen durchführen)
1. Wählen Sie die Nucleinsäure- Anwendung aus dem Hauptmenü.
2. Wenn das Fenster der Wellenlängenüberprüfung erscheint, stellen Sie sicher, dass der Hebel geschossen
ist und drücken Sie OK.
3. Wählen Sie die Art der Probe, die gemessen werden soll. Die Standardeinstellung ist DNA- 50.
4. Wählen Sie die Konzentrationsleinheiten aus der Aufklappliste neben dem farblich markierten
Konzentrations-Feld. Die Standarteinheiten sin ng/ µl.
5. Eine Standardwellenlänge von 340 nm wird automatisch für eine Normalisierung verwendet. Wählen Sie
entweder eine alternative Bezugswellenlänge oder deaktivieren Sie das baseline correction
( Basislinienkorrektur-) Feld, um keine Spektralnormalisierung durchzuführen.
6. Wählen Sie Add to report (zum Bericht hinzufügen) um alle Messungen automatisch zum aktuellen
Report hinzuzufügen. Die Standardeinstellung ist, dass alle Proben zu Berichten hinzugefügt werden. Das
Add to report Kontrollfeld muss vor den Messungen ausgewählt werden, um die Porbendaten in einem
Workbook zu speichern.
7. Wählen Sie Overlay spectra ( Überlagerung der Spektren) um mehrere Spektren zur selben Zeit
anzuzeigen.
3-11
Section 3- Applications