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Achtung! Acrylamid ist ein
Nervengift. Tragen Sie immer
Handschuhe beim Umgang mit
in welcher Form und tragen
eine Maske beim Wiegen das
Pulver. Nie Mund pipettieren die
Lösung.
Anhang A. Laemmli-System Gele
Tabelle 4. Laemmli Gelen - Endkonzentrationen
Trenngel
Acrylamid end.
10% T*, 2,6% C
Tris-Cl
0,375 M
Tris-Glycine
pH
SDS
0,1%
†
APS
0,05% w/v
TEMED
‡
0,05% v/v
* Um jede andere gewünschte Endkonzentration zu erzielen, passen Sie
die Acrylamid-Lager und Wassermengen. Datenträger für verschiedene
Konzentrationen sind in Tabelle 5 aufgeführt.
†
Ammoniumpersulfat.
‡
Tetramethylethylendiamin
Die Laemmli-System ist die häufigste Elektrophorese-
Protokoll für die SDS-denaturierte Proteine . Die
führenden Ionen in dieser diskontinuierlichen
Puffersystems Chlorid ist und das hintere Ionen
Glycin ist. Dementsprechend enthalten die Trenngel
und die Stacking-Gel Tris-Cl-Puffer (unterschiedlicher
Konzentration und pH), und die Elektrophorese-Puffer
enthält Tris-Glycin ist. Alle Puffer enthalten 0,1% SDS.
Polyacrylamid-Gel-Zusammensetzung wird durch zwei
verschiedene Prozentsätze angegeben:
g(acrylamide + bisacrylamide)
%T =
g(bisacrylamide)
%C =
g(acrylamide + bisacrylamide)
Die gesamte Prozent Acrylamid (% T) in der
Trenngelzusammensetzung, die von 4 bis 20% liegen
kann, bestimmt die Porengröße. Üblicherweise
verwendete Menge an Vernetzungsmittel (% C)
beträgt 2,6%. Im folgenden Beispiel-System ist das
Auflösungsvermögen Gel-Zusammensetzung 10% T,
2,6% C, die in einer mittleren Porengröße ergibt. Das
Stapeln Gelzusammensetzung beträgt 4% T, 2,6% C.
Das T% im Sammelgel niedriger ist, weil eine größere
Porengröße ist nicht erforderlich.
Sammelgel
4% T, 2,6% C
0,125 M
8,8
6,8
0,1%
0,05 – 0,1% w/v
0,05 – 0,1% v/v
100 ml
Elektrophorese-
Puffer
0,025 M Tris base
0,192 M glycine
~8,3
0,1%
× 100
× 100
•
p29
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