Leica Biosystems Kreatech FISH FUS (16p11) Break - XL Gebrauchsanleitung

Seite von 150

/ 150
Lesezeichen

Verfügbare Sprachen

Quicklinks

Diese Anleitung herunterladen

Kreatech™ FISH probes

FUS (16p11) Break – XL for BOND

Catalog No: KBI-XL017

EN - Instructions for use

FR - Mode d'emploi

DE - Gebrauchsanleitung

IT - Istruzioni per l'uso

ES - Instrucciones de uso

PT - Instruções de Utilização

NL - Gebruiksaanwijzing

SE - Instruktioner för användning

DA - Brugsanvisning

TR - Kullanma talimatları

Inhaltszusammenfassung für Leica Biosystems Kreatech FISH FUS (16p11) Break - XL

Seite 1 Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND Catalog No: KBI-XL017 EN - Instructions for use FR - Mode d’emploi DE - Gebrauchsanleitung IT - Istruzioni per l’uso ES - Instrucciones de uso PT - Instruções de Utilização NL - Gebruiksaanwijzing SE - Instruktioner för användning DA - Brugsanvisning...
Seite 2 Kreatech FISH probes...
Seite 3 Kreatech FISH probes Table of Contents - Instructions for use - Mode d’emploi - Gebrauchsanleitung - Istruzioni per l’uso - Instrucciones de uso - Instruções de Utilização - Gebruiksaanwijzing - Instruktioner för användning - Brugsanvisning - Kullanma talimatları...
Seite 4 Kreatech FISH probes...
Seite 5 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND Catalog No: KBI-XL017 Intended Use For in vitro diagnostic use FUS (16p11) Break - XL for BOND is intended for use on sarcoma formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue sections. The probes are to be used in combination with the BOND FISH Kit (DS9636) on an automated BOND system (includes BOND-MAX system and BOND-III system).
Seite 6 Kreatech FISH probes using the BOND FISH kit, tissue sections are to be manually dehydrated and mounted with DAPI. Results are interpreted by fluorescence microscopy using the recommended filters with the appropriate wavelengths. Reagents Provided Product Product No. Volume Composition Description FUS (16p11) pKBI- 1 ml, 10x PlatinumBright ™...
Seite 7 Kreatech FISH probes Table 1: Chromosome map showing the size of the probes in kilobasepair (kB), chromosome band, and genomic position defined by STS markers . The arrow adjacent to the gene indicates the transcription direction of the gene. In green FUS (16p11) Proximal - XL. In red FUS (16p11) Distal - XL. See the Leica website for more information on chromosome maps. D16S2574E 785 kB RH47854 16p11.2 SHGC-106097 560 kB D16S2933E 1) M aps and locations are based on UCSC genome browser, build GRCh37/hg19, Feb.2009.
Seite 8 Kreatech FISH probes Materials Required But Not Provided efer to “Using BOND Reagents” in your BOND user documentation for a complete list of materials required for specimen treatment and in situ hybridization using the BOND system (includes BOND-MAX system and BOND-III system). In addition to the generic BOND reagents, the following reagents are specifically required for the analysis of suitable patient material using Kreatech FISH probes on the BOND system (includes BOND-MAX system and BOND-III system).
Seite 9 Kreatech FISH probes • DAPI (e.g. LK-095A or LK-096A) DAPI counterstaining is not automatically performed as part of the FISH protocol on BOND and is to be done manually using the preferred concentration of DAPI counterstain / antifade. Specimens Kreatech FISH probes have been tested on FFPE tissues which were cut at ~5 µm. Tissue blocks and cut slides should be stored according to the recommended storage and handling conditions for optimal results, see Leica website.
Seite 10 Kreatech FISH probes Reagent Volume used (recommended) Probe 1 (10x) - Red 1.0 ml Probe 2 (10x) - Green 1.0 ml BOND Hybridization solution 8.0 ml (AR9037) Total volume (1x final 10 ml concentration) # Tests Up to 40 tests After dilution of the probe, the mixture is to be transferred to an appropriate BOND container (titration container, 7 ml open container or 30 ml open container, depending on prepared volumes) and registered as “DNA probe” in the BOND.
Seite 11 Kreatech FISH probes Instructions for use: Pretreatment and Protocols Kreatech FISH probes have been validated using the BOND FISH kit, BOND ancillary reagents and the BOND pretreatment and staining protocols shown in Table 2. The final protocol may vary according to the tissue used by the user. Any deviations from the prescribed protocols must be validated by the user.
Seite 12 Kreatech FISH probes Signal patterns FUS (16p11) Break - XL for BOND can be used to detect translocations involving the FUS gene in FFPE tissues. The probe has been validated on sarcoma tissues using the protocols shown in table 2. FUS (16p11) Break - XL for BOND is designed as a dual-color assay to detect translocations of the FUS gene region at 16p11. The normal signal pattern shows two red/green fusion signals (2F), while a translocations involving the FUS gene results in one fusion signal for normal chromosome 16 and one red and one green signal for the translocation (1F1R1G).
Seite 13: Troubleshooting
Kreatech FISH probes Storage and Stability Protect probes from strong and direct light. Store at 2 - 8 °C. The unopened product is stable under these conditions up to the expiry date indicated on the vial label. Return undiluted reagent to 2 - 8 °C immediately after use. Diluted/ mixed probe reagent stored in a BOND container should be returned to 2 - 8 °C after being run. After probe dilution, probes mixtures are stable for up to 30 days. After this time period the diluted mixture may result in suboptimal results.
Seite 14 Kreatech FISH probes to prevent confusion. Alternatively, a direct dilution of up to 1:3000 of Enzyme concentrate 1 can be used instead of the serial dilution of *Enzyme 1. Probe dilution and Signal intensity: A 1x final probe concentration is recommended for use but optimal probe balance is dependent on factors such as tissue age, tissue fixation, pretreatment protocol, and personal preference. Optimal concentrations and probe ratios may vary and are to be determined empirically by the end-user.
Seite 15 Kreatech FISH probes Product Specific Limitations Users who deviate from recommended test procedures must accept responsibility for interpretation of patient results under these circumstances. Protocol times may vary due to variation in tissue type, fixation and processing. In addition, BOND Enzyme concentration and incubation time may require optimization depending on tissue type, processing and fixation conditions. Further Information in situ Further information hybridization with...
Seite 16 Kreatech FISH probes DANGER FORMAMIDE Hazard statement H360D May damage the unborn child. Precautionary statements P201 Obtain special instructions before use. P280 Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face protection. P308+P313 If exposed or concerned: Get medical advice/attention. P405 Store locked up. P501 D ispose of contents/container to authorised chemical landfill or if organic to high temperature incineration Consult the SDS for full details. To obtain a copy of the Safety Data Sheet contact your local distributor or regional office of Leica Biosystems. Safety Data Sheets are available on the Leica Biosystems website, www.LeicaBiosystems.com...
Seite 17 Kreatech FISH probes • I f reagents or specimens come into contact with sensitive areas, wash with copious amounts of water. Seek medical advice • Clean up spillages immediately using suitable disposable materials • All materials must be disposed of in accordance with local legislation. • R etrieval steps, incubation times or temperatures, other than those specified, may give erroneous results. Any such change must be validated by the user. Bibliography 1. C linical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.
Seite 18 Kreatech FISH probes...
Seite 19 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND Numéro de référence: KBI-XL017 Utilisation prévue Pour le diagnostic in vitro FUS (16p11) Break - XL for BOND est destiné à être utilisé sur des coupes de tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) de sarcome. Les sondes doivent être utilisées en association avec le BOND FISH kit (DS9636) dans un système automatisé...
Seite 20 Kreatech FISH probes au formol. Suite à un pré-traitement adéquat, à l'hybridation des Kreatech FISH probes et au lavage rigoureux post-hybridation à l'aide du BOND FISH kit, les coupes tissulaires doivent être déshydratées manuellement et montées avec du DAPI. L'interprétation des résultats s'effectue par microscopie à fluorescence à l'aide des filtres recommandés et des longueurs d'ondes adéquates. Réactifs fournis Description Numéro de Volume Composition du produit produit...
Seite 21 Kreatech FISH probes FUS (16p11) Distal - XL est optimisé pour détecter des régions génomiques distales aux points de rupture dans la région du gène FUS. Les deux sondes combinées sont utilisées pour détecter les translocations impliquant le gène FUS à 16p11. Tableau 1 : carte de chromosomes montrant la taille des sondes en kilopaires de base (kpb), la bande de chromosome et la position génomique définie par des marqueurs STS . La flèche en regard du gène...
Seite 22 Kreatech FISH probes Matériel requis mais non fourni: Consultez la rubrique « Utilisation des réactifs BOND » de votre documentation d'utilisateur BOND pour obtenir la liste complète des matériaux requis pour le traitement de spécimens et d'hybridation in situ à l'aide du système BOND (comprenant les systèmes BOND-MAX et BOND-III).
Seite 23 Kreatech FISH probes pour l'obtention de résultats FISH optimaux. • DAPI (par ex., LK-095A ou LK-096A) La contre-coloration au DAPI n'est pas réalisée automatiquement dans le cadre du protocole FISH sur BOND et doit s'effectuer manuellement en employant la concentration privilégiée de DAPI counterstain / antifade. Spécimens Les Kreatech FISH probes ont été testées sur des tissus FFPE coupés à ~5 µm. Les blocs tissulaires et les lames de coupes doivent être stockés conformément aux conditions de stockage et de manipulation recommandées pour l'obtention de résultats optimaux, consultez le...
Seite 24 Kreatech FISH probes Réactif Volume utilisé (recommandé) Sonde 1 (10x) - Rouge 1,0 ml Sonde 2 (10x) - Vert 1,0 ml BOND Hybridization solution 8,0 ml (AR9037) Volume total (concentration 10 ml finale 1x) Nb de tests Jusqu'à 40 tests Après dilution de la sonde, le mélange doit être transféré dans un récipient adéquat (récipient de titrage, récipient ouvert de 7 ml BOND ou de 30 ml, en fonction des volumes préparés) et enregistré en tant que « DNA probe» dans le système BOND.
Seite 25 Kreatech FISH probes Mode d'emploi : Pré-traitement et protocoles Les Kreatech FISH probes ont été validées à l'aide du BOND FISH kit, des réactifs secondaires BOND et des protocoles de pré-traitement et de coloration BOND indiqués dans le Tableau 2. Le protocole final peut varier en fonction des tissus utilisés par l'opérateur. Tout écart par rapport aux protocoles prescrits doit être validé par l'utilisateur. Tableau 2 :Protocoles d'utilisation des Kreatech FISH probes Section du protocole Nom du protocole Type du protocole BOND Staining –...
Seite 26 Kreatech FISH probes Schémas de signal FUS (16p11) Break - XL for BOND peut être utilisé pour détecter les translocations impliquant le gène FUS dans des tissus FFPE. La sonde a été validée sur des tissus de sarcome selon les protocoles indiqués dans le tableau 2. FUS (16p11) Break - XL for BOND est conçu comme un dosage à double couleur afin de détecter les translocations de la région du gène FUS à 16p11. Le modèle de signal normal présente deux signaux de fusion rouges/verts (2F) tandis qu'une translocation impliquant le...
Seite 27 Kreatech FISH probes Stockage et stabilité Protégez les sondes de toute exposition intense et directe à la lumière. Stockez entre 2 et 8 °C. Dans de telles conditions, le produit intact est stable jusqu'à la date d'expiration indiquée sur l'étiquette du flacon. Le réactif non dilué doit être remis dans un environnement de 2 à 8 °C immédiatement après utilisation. Le réactif de sonde dilué/ mélangé stocké dans un récipient BOND doit être replacé dans un environnement de 2 à 8 °C après utilisation.
Seite 28 Kreatech FISH probes afin d'éviter toute confusion. Il est également possible d'utiliser une dilution directe de l'Enzyme concentrate 1 pouvant aller jusqu'à 1:3000 plutôt qu'une dilution en série de l'*Enzyme 1. Dilution de la sonde et intensité du signal : Une concentration finale à 1x de la sonde est recommandée, mais l'équilibre optimal de la sonde dépend de facteurs tels que l'âge des tissus, la fixation des tissus, le protocole de pré-traitement et la préférence personnelle.
Seite 29 Kreatech FISH probes Limitations spécifiques au produit Les utilisateurs qui s'écartent des procédures de test recommandées doivent accepter d'être responsables de l'interprétation des résultats des patients dans de telles circonstances. Les durées de protocole peuvent varier en raison des variations de types de tissus, de leur fixation et de leur traitement. En outre, la concentration de l'enzyme BOND et la durée d'incubation pourraient nécessiter une optimisation en fonction du type de tissu, ainsi que des conditions de traitement...
Seite 30 Kreatech FISH probes déchets dangereux • Le formamide peut avoir des effets néfastes sur la reproduction humaine. Évitez toute inhalation, ingestion ou contact avec la peau sans protection. En cas de contact cutané, rincez avec une grande quantité d'eau pendant au moins 15 minutes. DANGER FORMAMIDE Mentions de danger H360D Peut nuire au fœtus. Conseils de prudence généraux P201 Prendre impérativement connaissance du mode d'emploi spécifique. P280 Porter des gants de protection/des vêtements de protection/un équipement de protection des yeux/du visage.
Seite 31 Kreatech FISH probes sécurité, contactez votre distributeur local ou le bureau Leica Biosystems de votre région. Les fiches de données de sécurité sont disponibles sur le site Internet de Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com • L es spécimens, avant et après fixation et tous les matériaux qui y sont exposés, ainsi que le volume de sonde restant, doivent être manipulés comme s'ils étaient susceptibles de transmettre une infection et mis au rebut avec les précautions adéquates.
Seite 32 Kreatech FISH probes Bibliographie 1. C linical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992. 2. V illanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Stan- dards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue ; proposed guideline. 1991 ; 7(9). Order code M29-P. 3. W ilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In : Wilkinson DG. (ed.) in situ Hybridization. A practical approach. 2nd Edition. New York : Oxford University Press, 1998, pp.1 - 13.
Seite 33 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND Katalog-Nr.: KBI-XL017 Verwendungszweck Zur In-vitro-Diagnostik FUS (16p11) Break - XL for BOND ist zur Verwendung bei Formalin- fixierten, in Paraffin eingebetteten (FFPE) Gewebeproben aus Sarkomen vorgesehen. Die Sonden müssen zusammen mit dem BOND FISH Kit (DS9636) und einem automatischen BONDSystem (einschließlich BOND-MAX System und BOND-III System) verwendet werden.
Seite 34: Im Lieferumfang Enthaltene Reagenzien
Kreatech FISH probes Gewebe verwendet. Nach angemessener Vorbehandlung, Hybridisierung der Kreatech FISH Probes und gründlicher Post- Hybridisierungs-Waschung mit dem BOND FISH Kit müssen Gewebeschnitte manuell dehydriert und mit DAPI versehen werden. Die Ergebnisse werden durch Fluoreszenzmikroskopie mit den empfohlenen Filtern angemessener Wellenlänge bewertet. Im Lieferumfang enthaltene Reagenzien Produkt- beschrei- Produkt-Nr.
Seite 35 Kreatech FISH probes eingesetzt, die das FUS-Gen bei 16p11 betreffen. Tabelle 1: Chromosomenkarte mit der Größe der Sonden in Kilo- Basenpaaren (kB), Chromosomenband und genomischer Position nach STS-Markern . Der Pfeil neben dem Gen zeigt die Transkriptionsrichtung des Gens an. In grün FUS (16p11) Proximal - XL. In rot FUS (16p11) Distal - XL. Weitere Informationen zu Chromosomenkarten finden Sie auf der Website von Leica.
Seite 36 Kreatech FISH probes Nicht im Lieferumfang enthaltene Materialien Eine vollständige Liste der zur Probenbehandlung und In-situ- Hybridisierung mit dem BOND System (einschließlich BOND-MAX System und BOND-III System) erforderlichen Materialien können Sie dem Kapitel „Verwendung der BOND Reagenzien“ in der BOND Benutzerdokumentation entnehmen.
Seite 37 Kreatech FISH probes • BOND Enzyme Pretreatment kit (AR9551) Für optimale FISH Ergebnisse ist eine Enzymverdauung in Kombination mit Wärmevorbehandlung erforderlich. • DAPI (z. B. LK-095A oder LK-096A) Eine DAPI-Gegenfärbung wird nicht automatisch mit BOND und dem FISH Protokoll durchgeführt, sondern muss manuell mit der gewünschten Konzentration DAPI Counterstain/Antifade Sonden Kreatech FISH Probes wurden an FFPE-Gewebe getestet, das zu ~5 µm zugeschnitten wurde. Gewebeblöcke und -schnitte müssen für optimale Ergebnisse entsprechend den empfohlenen Lagerungs- und Handhabungsbedingungen gelagert werden;...
Seite 38 Kreatech FISH probes Reagenz Verwendetes Volumen (empfohlen) Sonde 1 (10x) – Rot 1.0 ml Sonde 2 (10x) – Grün 1.0 ml BOND Hybridization solution 8.0 ml (AR9037) Gesamtvolumen bei (1x 10 ml Endkonzentration) Anzahl Bis zu 40 Tests Nach Verdünnung der Sonde muss die Mischung in einen geeigneten BOND Behälter (je nach Volumen Titrationsbehälter, offener 7-ml- Behälter oder offener 30-ml-Behälter) gegeben und im BOND System als „DNA Probe“ registriert werden.
Seite 39 Kreatech FISH probes Gebrauchsanweisung: Vorbehandlung und Protokolle Kreatech FISH Probes wurden mit dem BOND FISH Kit, den BOND Hilfsreagenzien und den in Tabelle 2 angegebenen BOND Vorbehandlungs- und Färbungsprotokollen validiert. Das Endprotokoll kann sich je nach dem vom Benutzer verwendeten Gewebe unterscheiden. Alle Abweichungen von den vorgeschriebenen Protokollen müssen vom Anwender validiert werden.
Seite 40: Gen Betreffenden Translokationen In Ffpe-Geweben Eingesetzt
Kreatech FISH probes Table 2: Protokolle für die Testdurchführung mit Kreatech FISH Probes BOND Protokoll- Protokollname Protokolltyp abschnitt Staining - ISH *FISH Protocol D Post-Hybridisierungs- Detection Waschung Prestaining - *Dewax Entfernung von Preparation Paraffin Prestaining – Heat HIER 25 min with Wärmevorbehandlung Pretreatment ER2 (100) , Epitop- Ruckgewinnüng Prestaining – Enzyme *Enzyme 5 for 35 min Enzymatische Pretreatment...
Seite 41 Kreatech FISH probes Detektion von Translokationen der FUS-Genregion bei 16p11 konzipiert. Das normale Signalmuster zeigt zwei rot/grüne Fusionssignale (2F), während eine das FUS-Gen betreffende Translokation zu einem Fusionssignal für das normale Chromosom 16 sowie einem roten und einem grünen Signal für die Translokation (1F1R1G) führt. Weiterführende Tests sind ratsam, wenn andere, untypische Muster auftreten.
Seite 42: Fehlerbehebung
Kreatech FISH probes Bedingungen bis zu dem auf dem Ampullenetikett angegebenen Verfallsdatum haltbar. Unverdünnte Reagenzien müssen direkt nach der Verwendung wieder bei 2 - 8 °C eingelagert werden. Verdünnte/gemischte Sondenreagenzien, die in einem BOND Behälter aufbewahrt werden, müssen nach der Verwendung wieder bei 2 - 8 °C gelagert werden. Nach der Sondenverdünnung sind Sondengemische mindestens 30 Tage lang stabil. Nach diesem Zeitraum können bei Verwendung der verdünnten Mischung suboptimale Ergebnisse auftreten.
Seite 43 Kreatech FISH probes eine direkte Verdünnung von Enzyme Concentrate 1 auf bis zu 1:3000 anstatt einer seriellen Verdünnung von *Enzyme 1 durchgeführt werden. Sondenverdünnung und Signalintensität: Eine endgültige Sondenkonzentration von 1x wird zur Verwendung empfohlen, die optimale Sondenbalance hängt jedoch von Faktoren wie dem Gewebealter, der Gewebefixierung, de Vorbehandlungsprotokoll und den Präferenzen des Anwenders ab. Optimale Konzentrationen und Sondenverhältnisse können schwanken und müssen vom Endanwender empirisch bestimmt werden.
Seite 44: Produktspezifische Beschränkungen
Kreatech FISH probes Vertretung von Leica Biosystems. Produktspezifische Beschränkungen Anwender, die von den empfohlenen Testverfahren abweichen, nehmen die Verantwortung für die Beurteilung der Patientenergebnisse unter diesen Umständen auf sich. Die Protokollzeiten können aufgrund von Unterschieden im Gewebetyp, der Fixierung und der Verarbeitung schwanken. Zudem kann für die BOND Enzym-Konzentrierungs- und Inkubationszeiten abhängig von Gewebetyp, Verarbeitung und Fixierungsbedingungen eine Optimierung erforderlich sein. Weitere Informationen Weitere Informationen zur In-situ-Hybridisierung mit BOND Reagenzien finden Sie in der BOND Benutzerdokumentation.
Seite 45 Kreatech FISH probes dementsprechend in der BOND Software als gefährlicher Abfall registriert werden. • F ormamid kann für die menschliche Fortpflanzung schädlich sein. Einatmen, Verschlucken und Kontakt mit ungeschützter Haut vermeiden. Bei Hautkontakt mit reichlich Wasser mindestens 15 Minuten lang waschen. GEFAHR FORMAMIDE Gefahrenhinweise H360D Kann das Kind im Mutterleib schädigen. SICHERHEITSHINWEISE P201 Vor Gebrauch besondere Anweisungen einholen. P280 Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen.
Seite 46 Kreatech FISH probes Das Sicherheitsdatenblatt erhalten Sie von Ihrem Vertriebshändler vor Ort oder der zuständigen Vertretung von Leica Biosystems. Sicherheitsdatenblätter sind auf der Website von Leica Biosystems unter www.LeicaBiosystems.com erhältlich. • S onden vor und nach der Fixierung, alle Materialien, die mit ihnen in Kontakt kommen, sowie überständiges Sondenvolumen müssen als potenziell infektiös behandelt und dementsprechend unter Beachtung der entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen entsorgt werden. • Reagenzien niemals mit dem Mund pipettieren und den Kontakt mit der Haut sowie den Kontakt der Schleimhäute mit Reagenzien oder...
Seite 47 Kreatech FISH probes dards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P. 3. W ilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In: Wilkinson DG. (ed.) in situ Hybridization. A practical approach. 2nd Edition. New York: Oxford University Press, 1998, pp.1 - 13. 4. F ISH on BOND User Guide (Bedienungsanleitung zu FISH auf BOND)
Seite 48 Kreatech FISH probes...
Seite 49 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND N. catalogo: KBI-XL017 Uso previsto Per uso diagnostico in vitro FUS (16p11) Break - XL per BOND è destinato all'utilizzo su sezioni tissutali di sarcoma fissate in formalina e incluse in paraffina (FFPE). Le sonde devono essere utilizzate in combinazione con il BOND FISH Kit (DS9636) su un sistema automatizzato BOND (comprende il sistema BOND-MAX e il sistema BOND-III).
Seite 50 Kreatech FISH probes lavaggio post-ibridazione mediante il BOND FISH kit, le sezioni tissutali devono essere disidratate manualmente e montate con DAPI. I risultati sono interpretati mediante microscopia a fluorescenza con l'uso dei filtri raccomandati per le lunghezze d'onda appropriate. Reagenti forniti Descrizione Codice Volume Composizione del prodotto prodotto FUS (16p11) pKBI- 1 ml, 10 x Sonde PlatinumBright™495 Proximal XL017G concentrato per DNA marcate con – XL fluoroforo in tampone di ibridazione. Il tampone di ibridazione contiene Formammide a <50%...
Seite 51 Kreatech FISH probes coinvolgono il gene FUS su 16p11. Tabelle 1: Mappa cromosomica che mostra le dimensioni delle sonde in kilobasepair (kB), la banda cromosomica e la posizione del genoma definiti dai marcatori STS . La freccia adiacente al gene indica la direzione di trascrizione del gene. FUS (16p11) Proximal - XL in verde. FUS (16p11) Distal - XL in rosso. Consultare il sito web di Leica per ulteriori informazioni sulle mappe cromosomiche. D16S2574E 785 kB RH47854 16p11.2 SHGC-106097 560 kB D16S2933E 1) M apper e posizioni sono basate su UCSC genome browser, build GRCh37/hg19, Feb.2009.
Seite 52 Kreatech FISH probes Materiali richiesti ma non forniti Fare riferimento a “Utilizzo dei reagenti BOND” nella documentazione per l'utente di BOND per un elenco completo dei materiali richiesti per il trattamento dei campioni e per l'ibridazione in situ usando il sistema BOND (include il sistema BOND-MAX e il sistema BOND-III).
Seite 53 Kreatech FISH probes • DAPI (es. LK-095A o LK-096A) La colorazione di contrasto DAPI non viene eseguita automaticamente nell'ambito del protocollo FISH su BOND e viene eseguita manualmente usando la concentrazione desiderata di DAPI counterstain / antifade. Campioni Le Kreatech FISH probes per BOND sono state verificate su tessuti FFPE tagliati a ~5 µm. Per ottenere risultati ottimali, i blocchi di tessuto e i vetrini tagliati devono essere conservati secondo le indicazioni per la conservazione e la manipolazione, riportate sul sito web di Leica.
Seite 54 Kreatech FISH probes Reagente Volume utilizzato (consigliato) Sonda 1 (10x) - Rosso 1,0 ml Sonda 2 (10x) - Verde 1,0 ml BOND Hybridization solution 8,0 ml (AR9037) Volume totale (alla concentrazione 10 ml finale 1x) Numero test Fino a 40 test Dopo la diluizione della sonda, la miscela deve essere trasferita in un contenitore BOND appropriato (contenitore di titolazione, contenitore aperto da 7 ml o contenitore aperto da 30 ml, in funzione dei volumi preparati) e registrato come “DNA probe” nel sistema BOND. Durante la preparazione delle diluizioni per la titolazione, assicurarsi di tener conto del volume inattivo del relativo BOND Open Container (per i valori fare riferimento alla documentazione per l'utente del sistema BOND). Il numero esatto di test eseguibili con un flacone dipende dal volume inattivo del contenitore utilizzato e dalla calibrazione dello...
Seite 55 Kreatech FISH probes Istruzioni per l’uso: Pretrattamento e protocolli Le Kreatech FISH probes sono state convalidate usando il BOND FISH kit, i reagenti ausiliari BOND e i protocolli pretrattamento e colorazione BOND predefiniti, mostrati nella Tabella 2. Il protocollo finale può variare in base al tessuto utilizzato dall'utente. Qualsiasi deviazione dai protocolli prescritti deve essere convalidata dall'utente. Table 2: Protocolli per l'uso delle Kreatech FISH probes Sezione del protocollo Nome del protocollo Tipo di protocollo...
Seite 56 Kreatech FISH probes Schemi di segnale FUS (16p11) Break - XL per BOND può essere utilizzato per rilevare le traslocazioni che coinvolgono il gene FUS in tessuti FFPE. La sonda è stata validata su tessuti di sarcoma utilizzando i protocolli indicati in tabella 2. FUS (16p11) Break - XL per BOND è progettato come un saggio a due colori per rilevare le traslocazioni della regione del gene FUS su 16p11.
Seite 57 Kreatech FISH probes convalidata dall'utente. Stoccaggio e stabilità Proteggere le sonde dalla luce forte e diretta. Conservare a 2 - 8 °C. Il prodotto non ancora aperto è stabile in queste condizioni fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta del flacone. Riportare il reagente non diluito a 2 - 8 °C immediatamente dopo l'uso. Il reagente della sonda diluito/miscelato conservato in un contenitore BOND deve essere riportato a 2 - 8 °C dopo la sessione di analisi. Dopo la diluizione della sonda, le miscele delle sonde sono stabili per almeno 30 giorni. Dopo questo periodo di tempo, la miscela diluita potrebbe generare risultati inferiori a quelli ottimali. Non c'è alcun segno evidente che indica contaminazione e/o instabilità della sonda. Condizioni di stoccaggio diverse da quelle specificate in precedenza devono essere verificate dall'utente. Risoluzione dei problemi Pretrattamento (sovradigestione): Le istruzioni per uso del BOND Enzyme Pretreatment kit (AR9551) raccomandano una diluizione di 1 goccia di Enzyme Concentrate 1 in 7 ml di Diluent da registrare come...
Seite 58 Kreatech FISH probes a una registrazione separata del reagente nel sistema BOND come *Enzyme 5, per evitare confusioni. Alternativamente, può essere utilizzata una diluizione diretta fino a 1:3000 dell'Enzyme concentrate 1, al posto della diluizione seriale di *Enzyme 1. Diluizione della sonda e intensità del segnale: Si raccomanda per l'uso una concentrazione finale 1x della sonda ma il bilanciamento ottimale della sonda dipende da fattori come l'età del tessuto, il fissaggio del tessuto, il protocollo di pretrattamento, oltre alle preferenze personali. Le concentrazioni ottimali e i rapporti delle sonde possono variare e devono essere determinati empiricamente dall'utente finale.
Seite 59: Ulteriori Informazioni
Kreatech FISH probes regionale di Leica Biosystems per segnalare qualsiasi colorazione insolita. Limitazioni specifiche del prodotto Gli utenti che si allontanano dalle procedure di test consigliate devono accettare la responsabilità dell'interpretazione dei risultati dei pazienti in tali circostanze. I tempi dei protocollo possono variare a causa dei diversi tipi di tessuto, del fissaggio e del trattamento.
Seite 60 Kreatech FISH probes quindi essere registrate nel software BOND come rifiuto pericoloso • La formammide può avere effetti dannosi per la riproduzione umana. Evitare l'inspirazione, l'ingestione e il contatto con la pelle non protetta. In caso di contatto con la pelle, lavare con abbondante acqua per almeno 15 minuti PERICOLO FORMAMIDE Dichiarazioni di pericolo...
Seite 61 Kreatech FISH probes di Sicurezza sono disponibili sul sito web di Leica Biosystems, www.LeicaBiosystems.com • I campioni, prima e dopo il fissaggio, e tutti i materiali esposti a essi, oltre al volume residuo della sonda, devono essere maneggiati come materiali in grado di trasmettere infezioni e smaltiti con le dovute precauzioni •...
Seite 62 Kreatech FISH probes 3. W ilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In: Wilkinson DG. (ed.) in situ Hybridization. A practical approach. 2nd Edition. New York: Oxford University Press, 1998, pp.1 - 13. 4. F ISH on BOND User Guide (Guida per l'utente di FISH su BOND)
Seite 63 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break– XL for BOND N.º de catálogo: KBI-XL017 Uso previsto Para uso diagnóstico in vitro FUS (16p11) Break - XL para BOND está prevista para su uso en secciones de tejido de sarcoma fijados en formol e incluidos en parafina (FFPE). Las sondas se deben usar junto con el BOND FISH Kit (DS9636) en un sistema BOND automatizado (incluye los sistemas BOND-MAX y BOND-III).
Seite 64 Kreatech FISH probes hibridación usando el BOND FISH kit, los cortes de tejidos se deben deshidratar y montar con DAPI manualmente. Los resultados se interpretan mediante microscopía de fluorescencia usando los filtros recomendados con las longitudes de onda adecuadas. Reactivos proporcionados Descripción N.º de Volumen Composición del producto producto FUS (16p11) pKBI- 1 ml, concen- Las sondas de ADN Proximal XL017G tración de PlatinumBright™ 495 – XL 10 x etiquetadas con fluoróforo en tampón de hibridación.
Seite 65 Kreatech FISH probes Tabla 1: Mapas cromosómicos en los que se muestran el tamaño de las sondas en kilopares de bases (kB), la banda cromosómica y la posición genómica definida por los marcadores STS . La flecha situada junto al gen indica la dirección de transcripción del gen. En verde FUS (16p11) Proximal - XL. En rojo FUS (16p11) Distal - XL. Consulte el sitio web de Leica para obtener más información sobre los mapas cromosómicos. D16S2574E 785 kB RH47854 16p11.2 SHGC-106097 560 kB D16S2933E 1) L os mapas y las ubicaciones se basan en UCSC genome browser, build GRCh37/hg19, Feb.2009.
Seite 66 Kreatech FISH probes Material necesario que no se suministra Consulte la sección “Uso de los reactivos BOND” de la documentación del usuario del sistema BOND para obtener una lista completa de los materiales necesarios para el tratamiento de muestras y la hibridación in situ usando el sistema BOND (incluye los sistemas BOND-MAX y BOND-III).
Seite 67 Kreatech FISH probes pretratamiento térmico para obtener resultados óptimos con FISH. • DAPI (p. ej., LK-095A o LK-096A) La contratinción DAPI no se lleva a cabo automáticamente como parte del protocolo FISH en el sistema BOND, por lo que se tiene que realizar manualmente usando la concentración preferida de DAPI counterstain / antifade. Muestras Las sondas Kreatech FISH probes se han analizado con tejidos FFPE con un grosor de ~ 5 µm. Para obtener resultados óptimos, los bloques y los portaobjetos cortados de tejidos se deben almacenar de acuerdo con las condiciones recomendadas de almacenamiento y manipulación. Consulte el sitio web de Leica.
Seite 68 Kreatech FISH probes Reactivo Volumen usado (recomendado) Sonda 1 (10 x) - rojo 1,0 ml Sonda 2 (10 x) - verde 1,0 ml BOND Hybridization solution 8,0 ml (AR9037) Volumen total a una concentración 10 ml final 1 x N.º de pruebas Hasta 40 pruebas Tras la dilución de la sonda, la mezcla se debe transferir a un contenedor BOND adecuado (contenedor de titulación, contenedor abierto de 7 ml o contenedor abierto de 30 ml, dependiendo de los volúmenes preparados) y registrar como “DNA probe”...
Seite 69 Kreatech FISH probes Instrucciones de uso: pretratamiento y protocolos Las sondas Kreatech FISH probes se han validado usando el BOND FISH kit, reactivos complementarios BOND y los protocolos predeterminados de pretratamiento y tinción BOND mostrados en la tabla 2. El protocolo final puede variar en función del tejido empleado por el usuario. El usuario debe validar cualquier desviación de los protocolos indicados.
Seite 70 Kreatech FISH probes Tabla 2: protocolos para procesar las sondas Kreatech FISH probes Parte del protocolo Nombre del protocolo Tipo de protocolo BOND Staining – ISH *FISH Protocol D Lavado tras la Detection hibridación Prestaining – *Dewax Eliminación de la Preparation parafina Prestaining –...
Seite 71 Kreatech FISH probes en 16p11. El patrón de señal normal muestra dos señales de fusión rojas/verdes (2F), mientras que una translocación que afecta al gen FUS genera una señal de fusión para el cromosoma 16 normal, y una señal roja y otra verde para la translocación (1F1R1G). Se recomienda realizar pruebas de seguimiento si se observan patrones atípicos. Patrón normal de las Traslocación asociada señales al gen FUS en 16p11 Patrón esperado 1F1R1G Consulte las pautas locales o generales para la interpretación de patrones de señal distintos a los mostrados en la tabla.
Seite 72 Kreatech FISH probes reactivo de la sonda diluido/mezclado almacenado en un contenedor BOND se debe volver a conservar a una temperatura de 2 - 8 °C tras haberlo procesado. Tras la dilución de la sonda, las mezclas de sondas se mantienen estables durante 30 días. Una vez transcurrido este periodo, la mezcla diluida puede causar resultados incorrectos. No hay indicios evidentes que indiquen la contaminación y/o la inestabilidad de la sonda. El usuario debe verificar las condiciones de almacenamiento diferentes a las indicadas anteriormente.
Seite 73 Kreatech FISH probes adecuado de la sonda depende de factores como la edad y la fijación del tejido, el protocolo de pretratamiento y las preferencias personales. Las concentraciones óptimas y las relaciones de la sonda pueden variar, y el usuario final las debe determinar de forma práctica. Volumen usado Ejemplo: reducir la potencia de la Reactivo (recomendado) señal verde Sonda 1 (10 x) - 1,0 ml Roja a 1 x: 1,0 ml...
Seite 74: Información Adicional
Kreatech FISH probes los resultados de los pacientes en estas circunstancias. Los tiempos de los protocolos pueden variar debido a las variaciones de los tipos de tejido, fijación y procesamiento. Además, es posible que la concentración y el tiempo de incubación de las enzimas BOND tengan que optimizarse en función del tipo de tejido y las condiciones de procesamiento y fijación. Información adicional Se puede encontrar información adicional sobre la hibridación in situ con los reactivos BOND en la documentación del usuario del sistema...
Seite 75 Kreatech FISH probes humana. Evite la inhalación, la ingestión o el contacto con la piel no protegida. Si se produce contacto con la piel, lávese con agua abundante durante al menos 15 minutos. PELIGRO FORMAMIDE ndicación de peligro H360D Puede dañar al feto. Precauciones P201 Pedir instrucciones especiales para su uso P280 Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección. P308+P313 en caso exposición manifiesta presunta: consultar con un médico. P405 Guardar bajo llave. P501 Desechar el contenido/recipiente en un vertedero autorizado de productos químicos o en el caso de contenido orgánico mediante incineración a alta temperatura.
Seite 76 Kreatech FISH probes Biosystems. Las hojas de datos de seguridad están disponibles en el sitio web de Leica Biosystems: www.LeicaBiosystems.com. • L as muestras, antes y después de la fijación, y todos los materiales expuestos a estas, así como el volumen de sonda sobrante, se deben manipular como si fueran capaces de transmitir infecciones y desechar de acuerdo con las precauciones adecuadas. • No pipetee nunca con la boca los reactivos y evite que los reactivos o las muestras entren en contacto con la piel y las membranas mucosas.
Seite 77 Kreatech FISH probes 3. W ilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In: Wilkinson DG. (ed.) in situ Hybridization. A practical approach. 2nd Edition. New York: Oxford University Press, 1998, pp.1 - 13. 4. F ISH on BOND User Guide (Guía del usuario para FISH en el sistema BOND).
Seite 78 Kreatech FISH probes...
Seite 79 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND N.º do catálogo: KBI-XL017 Utilização prevista Para uso em diagnóstico in vitro FUS (16p11) Break - XL para BOND destina-se ao uso em sarcoma fixado em formalina, secções de tecidos incluídos em parafina (FFPE). As sondas foram concebidas para serem usadas em conjunção com o BOND FISH kit (DS9636) num sistema automatizado BOND (que inclui os sistemas BOND-MAX e BOND-III).
Seite 80 Kreatech FISH probes as secções de tecidos devem ser manualmente desidratadas e montadas com DAPI. Os resultados são interpretados mediante microscopia de fluorescência utilizando os filtros recomendados com os comprimentos de onda corretos. Reagentes fornecidos Produto Nº produto Volume Composição Descrição pKBI- 1 ml, 10x Sondas de ADN (16p11) XL017G concentrado PlatinumBright™ 495 Proximal etiquetadas com fluoróforo –...
Seite 81 Kreatech FISH probes Tabela 1: Mapas genéticos indicando o tamanho das sondas em par de quilobase (kB), banda de cromossoma e posição genómica definida pelos marcadores STS . A seta adjacente ao gene indica a direção da transcrição do gene. Em FUS (16p11) Proximal - XL verde. Em FUS (16p11) Distal - XL vermelho. Consulte o website da Leica para mais informações sobre os mapas genéticos. D16S2574E 785 kB RH47854 16p11.2 SHGC-106097 560 kB D16S2933E 1 O s mapas e as localizações são baseadas num navegador de genoma UCSC, versão GRCh37/hg19, Fev. 2009.
Seite 82 Kreatech FISH probes Materiais necessários mas não fornecidos Consulte “Como usar os reagentes BOND” na documentação de utilizador BOND para consultar a lista completa de materiais necessários para o tratamento da amostra e a hibridização in situ com o sistema BOND (que inclui os sistemas BOND-MAX e BOND-III). Além dos reagentes genéricos BOND, os seguintes reagentes são especificamente necessários para a análise de material de doente adequado utilizando as Kreatech FISH probes no sistema BOND (que inclui os sistemas BOND-MAX e BOND-III).
Seite 83 Kreatech FISH probes • DAPI (p. e., LK-095A ou LK-096A) O meio de contraste DAPI não é realizado automaticamente como parte do protocolo FISH no BOND e deve ser feito manualmente utilizando a concentração preferida do meio de contraste DAPI. Amostras As Kreatech FISH probes foram testadas em tecidos FFPE que foram cortados a ~5 µm. Os blocos de parafina e as lâminas devem ser armazenados de acordo com as condições de armazenamento e tratamento recomendadas para os resultados ideais, consulte o website Leica.
Seite 84 Kreatech FISH probes Reagente Volume usado (recomendado) Sonda 1 (10x) - Vermelho 1,0 ml Sonda 2 (10x) - Vermelho 1,0 ml BOND Hybridization solution 8,0 ml (AR9037) Volume total (1x a concentração 10 ml final) # Testes Até 40 testes Após a diluição da sonda, a mistura deve ser transferida para um recipiente BOND apropriado (recipiente de titulação, recipiente aberto de 7 ml ou de 30 ml de acordo com os volumes preparados) e registada como “sonda de ADN” no BOND.
Seite 85 Kreatech FISH probes Instruções de utilização: pré-tratamento e protocolos As Kreatech FISH probes foram validadas com o BOND FISH kit, reagentes adjuvantes BOND e o pré-tratamento padrão BOND e protocolos de coloração ilustrados na Tabela 2. O protocolo final pode variar de acordo com o tecido usado pelo utilizador. Todos os desvios dos protocolos prescritos devem ser validados pelo utilizador. Tabela 2: Protocolos para executar as Kreatech FISH probes Secção protocolo BOND Nome protocolo Tipo protocolo...
Seite 86 Kreatech FISH probes Padrões de sinal FUS (16p11) Break - XL para BOND pode ser usado para detectar translocações que envolvem o gene FUS nos tecidos FFPE. A sonda foi validada nos tecidos de sarcoma usando os protocolos mostrados na tabela 2. FUS (16p11) Break - XL para BOND foi desenvolvido como um ensaio de duas cores para detectar translocações da região do gene FUS em 16p11. O padrão de sinal normal mostra dois sinais de fusão vermelho/verde (2F), enquanto uma translocação que envolve o gene...
Seite 87 Kreatech FISH probes protocolos indicados devem ser validados pelo utilizador. Armazenamento e estabilidade Proteger as sondas da luz direta e forte. Armazenar a 2 - 8 °C. O produto não aberto é estável sob estas condições até à data de validade indicada no rótulo do frasco. Reponha o reagente não diluído à temperatura 2 - 8 °C imediatamente após a utilização. O reagente da sonda diluído/misturado armazenado num recipiente BOND deve ser reposto à temperatura 2 - 8 °C após a execução. Após a diluição da sonda, as misturas da sonda mantém-se estáveis durante, pelo menos, 30 dias. Após este período, a mistura diluída pode originar resultados abaixo dos ideais. Não existem sinais óbvios que indiquem a contaminação e/ou instabilidade da sonda. As condições de armazenamento diferentes das especificadas acima têm de ser verificadas pelo utilizador.
Seite 88 Kreatech FISH probes de 1:300) e um registo separado do reagente no sistema BOND como *Enzyme 5 de modo a evitar a confusão. Em alternativa, pode usar-se a diluição direta de até 1:3000 de Enzyme concentrate 1 em vez da diluição serial da *Enzyme 1. Diluição da sonda e intensidade do sinal: Recomenda-se a utilização de uma concentração de sonda final a 1x, mas o equilíbrio ideal da sonda depende de fatores como a idade do tecido, a fixação do tecido, o protocolo do pré-tratamento e a preferência pessoal. As...
Seite 89 Kreatech FISH probes Contacte o distribuidor local ou o apoio ao cliente da sede regional da Leica Biosystems para comunicar a coloração invulgar. Limitações específicas de produto Os utilizadores que se desviem dos procedimentos de teste recomendados terão de aceitar a responsabilidade da interpretação dos resultados dos doentes nestas circunstâncias. As durações de protocolo podem variar devido à variação do tipo de tecido, fixação e processamento. Além disso, o tempo de incubação e concentração da Enzima BOND pode requerer a otimização de acordo com o tipo de...
Seite 90 Kreatech FISH probes Avisos e Precauções • Este produto destina-se ao diagnóstico in vitro apenas • Apenas para utilização profissional / laboratorial • A s K reatech F ISH p robes d estinam-se à u tilização e m s istemas B OND. Não utilizar reagentes depois de terminar o prazo de validade indicado no rótulo • U sar vestuário de proteção, luvas e proteção ocular/facial adequado...
Seite 91 Kreatech FISH probes P280 U sar luvas de proteção / vestuário de proteção / proteção dos olhos / proteção do rosto. P308+P313 Em caso de exposição ou suspeita de exposição: consulte um médico. P405 Armazenar em local seguro. P501 Eliminar o conteúdo/recipiente num aterro autorizado para produtos químicos ou, no caso de produtos orgânicos, por incineração a alta temperatura.
Seite 92 Kreatech FISH probes • Todos os materiais têm de ser eliminados de acordo com a legislação local. • O s passos de recuperação, os tempos de incubação e as temperaturas que não os especificados podem dar origem a resultados erróneos. O utilizador deverá validar todas essas alterações.
Seite 93 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND Catalogusnummer: KBI-XL017 Beoogd gebruik Voor in-vitro diagnostiek FUS (16p11) Break - XL voor BOND is ontwikkeld voor gebruik op formaline-gefixeerd, paraffine ingebedde (FFPE) weefsel coupes afkomstig van sarcomen. De probes dienen gebruikt te worden in combinatie met de BOND FISH Kit (DS9636) op een geautomatiseerd BOND systeem (omvat BOND-MAX systeem en BOND-III systeem).
Seite 94 Kreatech FISH probes Samenvatting en Verklaring reatech FISH probes worden gebruikt om een fluorescente in situ hybridisatie (FISH) kleuringsprocedure op formaline-gefixeerd, paraffine-ingebed weefsel uit te voeren. Volgend op voorbehandeling, hybridisatie van Kreatech FISH probes en post-hybridisatie stringent wassen met gebruik van de BOND FISH kit, moeten weefsel coupes manueel gedehydreerd worden en afgedekt worden met DAPI. Resultaten worden geïnterpreteerd m.b.v. fluorescentie microscopie met gebruik van aanbevolen filters met de juiste golflengte.
Seite 95 Kreatech FISH probes FUS (16p11) Distal - XL is geoptimaliseerd voor de detectie van genomische regio's distaal t.o.v. breekpunten in de FUS gen regio. Beide probes worden gecombineerd gebruikt voor de detectie van translocaties waarbij het FUS gen op 16p11 is betrokken. Tabel 1: De Chromosoomkaart toont de afmeting van de probes in kilobaseparen (kB), de chromosoomband, en de genomische positie aangeduid d.m.v. STS markers . De pijl naast het gen geeft de transcriptie...
Seite 96 Kreatech FISH probes Vereiste materialen, niet meegeleverd Raadpleeg “Using BOND Reagents” in uw “BOND user documentation” voor een compleet overzicht van benodigde materialen voor weefselbehandeling en in situ hybridisatie m.b.v het BOND systeem (omvat BOND-MAX systeem en BOND-III systeem). Behalve generieke BOND reagentia, zijn de volgende specifieke reagentia benodigd voor de analyse van geschikt patiëntenmateriaal m.b.v. Kreatech FISH probes op het BOND systeem (omvat BOND- MAX systeem en BOND-III systeem).
Seite 97 Kreatech FISH probes • DAPI (bijv. LK-095A of LK-096A) Tegenkleuring met DAPI is geen onderdeel van het FISH protocol op BOND en moet handmatig worden uitgevoerd met de gewenste concentratie DAPI counterstain / antifade. Testmonsters Kreatech FISH probes zijn getest op FFPE weefsel coupes van ~5 µm. Weefsel blokken en coupes moeten worden bewaard volgens de aanbevolen opslag en gebruikscondities voor optimale resultaten, raadpleeg de Leica website.
Seite 98 Kreatech FISH probes Reagens Benodigd volume (aanbevolen) Probe 1 (10x) - Rood 1,0 ml Probe 2 (10x) - Groen 1,0 ml BOND Hybridization solution 8,0 ml (AR9037) Totaal volume bij (1x) 10 ml # Testen Tot 40 testen Na het verdunnen van de probe, moet de mix overgebracht worden in een geschikte BOND container (titratie container, 7 ml open container of 30 ml open container, afhankelijk van het bereide volume) en geregistreerd als “DNA probe” in de BOND. Houdt bij het maken van verdunningen rekening met het dode volume van de gebruikte BOND Open Container (raadpleeg uw BOND user documentatie). Het dode volume van de gebruikte container en de kalibratie van het BOND systeem bepalen samen het aantal tests uit...
Seite 99 Kreatech FISH probes Gebruiksinstrukties: Voorbehandeling en Protocollen Kreatech FISH probes zijn gevalideerd met gebruik van de BOND FISH kit, BOND standaard reagentia en de BOND voorbehandelings- en kleurings protocollen in Tabel 2. Het eind protocol kan variëren afhankelijk van het gebruikte weefsel. Alle afwijkingen van de voorgeschreven protocollen moeten worden gevalideerd door de gebruiker.
Seite 100 Kreatech FISH probes Tabel 2: Standaardprotocollen voor het uitvoeren van de Kreatech FISH probes BOND Protocol Sectie Protocol Naam Protocol Type Staining – ISH *FISH-protocol D Post Hybridisatie Detection Prestaining – *Dewax Verwijderen van Preparation paraffine Prestaining - Heat HIER 25 min with Hitte voorbehandeling Pretreatment ER2 (100)
Seite 101 Kreatech FISH probes test om translocaties waarbij de FUS gen regio op 16p11 is betrokken te detecteren. Het normale signaal patroon toont twee rood/groene fusie signalen (2F), terwijl een translocatie van het FUS gen resulteert in een fusie signaal voor het normale chromosoom 16 en separate rode en groene signalen voor de translocatie (1F1R1G). Als andere, atypische patronen worden waargenomen, wordt het geadviseerd om vervolg testen uit te voeren.
Seite 102: Problemen Oplossen
Kreatech FISH probes De onverdunde probe dient direct na gebruik gekoeld opgeslagen te worden bij 2 - 8 °C. Verdunde/gemixte probe reagens bewaard in een BOND container dient direct na de BOND run opgeslagen te worden bij 2 - 8 °C. Na verdunning blijven probe mixen tot 30 dagen stabiel. Na deze periode kan gebruik van de verdunde mix tot suboptimale resultaten leiden. Er zijn geen indicaties die wijzen op contaminatie en/of instabiliteit van de probe. Opslag van de probe onder ander condities dan hier gespecificeerd moet door de gebruiker gevalideerd worden.
Seite 103 (AR9037) Totaal volume 10 ml 10 ml bij 1x eindcon- centratie Aantal tests tot 40 testen tot 40 testen Neem contact op met uw lokale distributeur of de klanten service van uw regionale kantoor van Leica Biosystems om ongewone kleuring te melden.
Seite 104 Kreatech FISH probes Product Specifieke Beperkingen Gebruikers die afwijken van aanbevolen procedures moeten de verantwoordelijkheid accepteren voor de interpretatie van patiëntresultaten onder deze omstandigheden. Protocoltijden kunnen variëren t.g.v. variatie in weefseltype, fixatie en doorvoerprotocol. Mogelijk moeten BOND Enzyme concentratie en incubatietijd geoptimaliseerd worden afhankelijk van weefseltype, fixatie en doorvoerprotocol.
Seite 105 Kreatech FISH probes • Formamide kan negatieve effecten op de ontwikkeling van het ongeboren kind hebben. Voorkom inhalatie, inname of contact met de onbeschermde huid. In geval van huidcontact, overvloedig wassen met veel water gedurende ten minste 15 minuten. GEVAAR FORMAMIDE Gevaarsverklaring H360D Kan de vruchtbaarheid of het ongeboren kind schaden. Voorzorgsmaatregelen P201 Alvorens gebruiken, speciale aanwijzingen raadplegen. P280 Beschermende handschoenen/beschermende kleding/ oogbescherming/gelaatsbescherming dragen. P308+P313 Na (mogelijke) blootstelling: een arts raadplegen.
Seite 106 Kreatech FISH probes van Leica Biosystems om een kopie van de SDS te ontvangen. SDS zijn ook beschikbaar op de Leica Biosystems webpagina, www.LeicaBiosystems.com • M onsters, voor en na fixatie en alle daaraan blootgestelde materialen en restanten van de probe moeten als infectieus beschouwd worden en met de van toepassing zijnde voorzorgsmaatregellen afgevoerd worden.
Seite 107 Kreatech FISH probes infectious diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P. 3. W ilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In: Wilkinson DG. (ed.) in situ Hybridization. A practical approach. 2nd Edition. New York: Oxford University Press, 1998, pp.1 - 13. 4. F ISH on BOND User Guide...
Seite 108 Kreatech FISH probes...
Seite 109 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND Katalognr: KBI-XL017 Avsedd användning För diagnostisk användning in vitro FUS (16p11) Break - XL för BOND är avsedd att användas för formalinfixerade, parafininbäddade (FFPE) vävnadssnitt av sarkom. Proberna ska användas i kombination med BOND FISH Kit (DS9636) på...
Seite 110 Kreatech FISH probes DAPI. Resultaten tolkas med fluorescensmikroskopi med hjälp av de rekommenderade filtren med lämpliga våglängder. Medföljande reagenser Produkt- Produktnr. Mängd Sammansättning beskrivning pKBI- 1 ml, 10x PlatinumBright™495 (16p11) XL017G koncentrat fluorofor-märkta DNA-prober Proximal i hybridiseringsbuffert. – XL Hybridiseringsbuffert innehåller < 50 % formamid pKBI- 1 ml, 10x PlatinumBright™550 fluorofor- (16p11) XL017R koncentrat märkta DNA-prober Distal i hybridiseringsbuffert. – XL Hybridiseringsbuffert innehåller <...
Seite 111 Kreatech FISH probes Tabell 1: Kromosomkarta som visar probernas storlek i kilobaspar (kB), kromosomband och position i genomet definierad av STS-markörer Pilen bredvid genen anger dess transkriptionsriktning. I grönt FUS (16p11) Proximal - XL. I rött FUS (16p11) Distal - XL. Se Leicas hemsida för mer information om kromosomkartor. D16S2574E 785 kB RH47854 16p11.2 SHGC-106097...
Seite 112 Kreatech FISH probes Nödvändigt material som inte medföljer Se “Användning av BOND-reagens” i din BOND-användardokumentation för en komplett lista över material som krävs för behandling av prover och hybridisering in situ med BOND-systemet (inkluderar BOND-MAX- system och BOND-III-system). Utöver de generiska BOND-reagens krävs följande specifika reagens för analys av lämpligt patientmaterial med Kreatech FISH probes på BOND-systemet (inkluderar BOND-MAX-system och BOND-III-system).
Seite 113 Kreatech FISH probes • DAPI (t.ex. LK-095A eller LK-096A) DAPI-infärgning genomförs inte automatiskt som en del av FISH- protokollet på BOND och ska utföras manuellt med föredragen koncentration av DAPI counterstain / antifade. Prover Kreatech FISH probes har testats på FFPE-vävnader, vilka snittades vid ~5 µm. Vävnadsblock och snittade objektglas ska förvaras enligt rekommenderade förvarings- och hanteringsförhållanden för optimala resultat, se Leicas hemsida.
Seite 114 Kreatech FISH probes Reagens Använd volym (rekommenderad) Prob 1 (10x) - Röd 1,0 ml Prob 2 (10x) - Grön 1,0 ml BOND Hybridization solution 8,0 ml (AR9037) Total volym (1x slutlig 10 ml koncentration) Antal Upp till 40 prover Efter spädning av proben ska blandningen överföras till en lämplig BOND-behållare (titreringsbehållare, 7 ml öppen behållare eller 30 ml öppen behållare, beroende på framställda volymer) och registreras som “DNA-prob” i BOND.
Seite 115 Kreatech FISH probes Bruksanvisning: Förbehandling och protokoll Kreatech FISH probes har validerats med BOND FISH kit, BOND hjälpreagens och de BOND-protokoll för förbehandling och färgning som anges i tabell 2. Det slutliga protokollet kan variera i enlighet med vävnaden som används av användaren. Eventuella avvikelser från de föreskrivna protokollen måste valideras av användaren. Tabell 2: Protokoll för att köra Kreatech FISH probes BOND protokollavsnitt Protokollnamn Protokolltyp Staining –...
Seite 116 Kreatech FISH probes Signalmönster FUS (16p11) Break - XL för BOND kan användas för att registrera translokationer av FUS-genen i FFPE-vävnad. Sonden har validerats på sarkomvävnader med de protokoll som visas i tabell 2. FUS (16p11) Break - XL för BOND är konstruerad som ett dubbelfärgstest för att registrera translokationer av FUS-genregionen vid 16p11. Det normala signalmönstret visar två röd/gröna fusionssignaler (2F), medan en translokation av FUS-genen resulterar i en fusionssignal för normal kromosom 16 och en röd och en grön signal för translokationen (1F1R1G).
Seite 117 Kreatech FISH probes Förvaring och stabilitet Skydda proberna från starkt och direkt solljus. Förvara vid 2 - 8 °C. Oöppnad produkt är stabil under dessa förhållanden fram till utgångsdatumet som anges på flaskans etikett. Förvara outspädd reagens vid 2 - 8 °C direkt efter användning. Utspädd/blandad probreagens som förvaras i en BOND-behållare bör förvaras vid till 2 - 8 °C efter användning. Efter utspädning av proben är probblandningar stabila i upp till 30 dagar. Efter denna period kan den utspädda blandningen ge suboptimala resultat.
Seite 118 Sond 2 (10x) 1,0 ml Grön vid 0,5x: 0,5 ml – grön BOND 8,0 ml 8,5 ml Hybridization solution (AR9037) Total volym 10 ml 10 ml vid 1x slutlig koncentration Antal tester upp till 40 tester upp till 40 tester Kontakta din lokala distributör eller kundservice på Leica Biosystems regionkontor för att rapportera eventuell ovanlig färgning.
Seite 119 Kreatech FISH probes Produktspecifika begränsningar Användare som avviker från rekommenderade testprocedurer måste ta ansvar för tolkningen av patientresultat under dessa omständigheter. Protokolltider kan variera efter variationer i vävnadstyp, fixering och bearbetning. Dessutom kan BOND-enzymkoncentrationen och inkubationstiden behöva optimeras beroende på vävnadstyp, bearbetning och fixeringsförhållanden. Ytterligare information Mer information om hybridisering in situ med BOND-reagens återfinns i din BOND-användardokumentation.
Seite 120 Kreatech FISH probes med oskyddad hud. Vid hudkontakt ska huden tvättas med stora mängder vatten i minst 15 minuter FARA FORMAMID Riskangivelser H360D Kan skada foster. Skyddsangivelser P201 Inhämta speciell bruksanvisning. P280 Använd skyddshandskar / skyddskläder / ögonskydd / ansiktsskydd. P308 + P313 Vid exponering eller oro: Uppsök medicinsk rådgivning/vård. P405 Förvara inlåst. P501 Kassera innehåll/behållare hos en auktoriserad insamlingsplats för kemiskt avfall eller till högtemperaturförbränning i händelse av organiskt material.
Seite 121 Kreatech FISH probes Bibliografi 1. C linical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992. 2. V illanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Stan- dards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P. 3. W ilkinson DG. The theory and practice of in situ hybridization. In: Wilkinson DG. (ed.) in situ Hybridization. A practical approach. 2nd Edition. New York: Oxford University Press, 1998, pp.1 - 13.
Seite 122 Kreatech FISH probes...
Seite 123 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH probes FUS (16p11) Break – XL for BOND Katalognr: KBI-XL017 Anvendelse Til in vitro -diagnostisk brug FUS (16p11) Break - XL til BOND er beregnet til brug på formalinfikserede, paraffinindlejrede (FFPE) vævssektioner fra sarkom. Proberne skal benyttes i kombination med BOND FISH Kit (DS9636) på...
Seite 124 Kreatech FISH probes med DAPI. Resultaterne fortolkes med fluorescensmikroskopi ved anvendelse af de anbefalede filtre med passende bølgelængder. Medfølgende reagenser Produkt Produkt nr. Volumen Sammensætning Beskrivelse pKBI- 1 ml, 10 x PlatinumBright™495 (16p11) XL017G koncentrat fluorofor-mærket DNA-probe Proximal i hybridiseringsbuffer. – XL Hybridiseringsbuffer indeholder < 50 % formamid pKBI- 1 ml, 10 x PlatinumBright™550 (16p11) XL017R koncentrat fluorofor-mærket DNA -probe Distal...
Seite 125 Kreatech FISH probes Tabel 1: Kromosomkort, der viser størrelsen på proberne i kilobasepar (kB), kromosombånd og genomisk position defineret af STS-markører1. Pilen tæt ved genet indikerer transkriptionsretningen på genet. Grøn FUS (16p11) Proximal - XL. Rød FUS (16p11) Distal - XL. Se Leicas hjemmeside for mere information om kromosomkort. D16S2574E 785 kB RH47854 16p11.2 SHGC-106097 560 kB D16S2933E 1) Kort og steder er baseret på UCSC genome browser, build GRCh37/hg19, Feb.2009.
Seite 126 Kreatech FISH probes Nødvendige materialer der ikke medfølger Se “Brug af BOND-reagenser” i din BOND-brugerdokumentation for en komplet oversigt over materialer, som kræves til prøvebehandling og in situ -hybridisering vha. BOND-systemet (inkluderer BOND-MAX- systemet og BOND-III-systemet). Udover de generiske BOND-reagenser er følgende reagenser specielt krævet til analyse af passende patientmateriale vha. Kreatech FISH probes på...
Seite 127 Kreatech FISH probes • DAPI (f.eks., LK-095A eller LK-096A) DAPI-kontrastfarvning udføres ikke automatisk som del af FISH Protocollen på BOND og skal udføres manuelt ved brug af den foretrukne koncentration af DAPI counterstain / antifade. Prøver Kreatech FISH probes er blevet testet på FFPE-skåret ved ~5 µm. Vævsblokke og anvendte objektglas bør opbevares ifølge de anbefalede opbevarings- og håndteringsforhold for optimale resultater, se Leicas hjemmeside.
Seite 128 Kreatech FISH probes Efter fortynding af proberne skal blandingen overføres til en egnet BOND-beholder (titreringsbeholder, 7 ml åben beholder eller 30 ml åben beholder, afhængigt af de forberedte volumener) og registreres som “DNA probe” i BOND. Ved forberedelse af fortyndinger til titrering skal der sørges for, at der gøres plads til død volumen for den egnede BOND Open Container(for værdier se din BOND-brugerdokumentation). Det nøjagtige antal af tests fra et hætteglas afhænger af den anvendte beholders død volumen og kalibreringen af BOND-systemet.
Seite 129 Kreatech FISH probes Tabel 2: Protokoller til kørsel af Kreatech FISH probes BOND-protokolafsnit Protokolnavn Protokoltype Staining – ISH *FISH Protocol D Efter hybridisering Detection Vask Prestaining – *Dewax Fjernelse af paraffin Preparation Prestaining – Heat HIER 25 min with Varme forbehandling, Pretreatment ER2 (100) epitopgenfinding Prestaining –...
Seite 130 Kreatech FISH probes for normalt kromosom 16 og ét rødt og ét grønt signal for translokationen (1F1R1G). Opfølgningstestning anbefales, hvis andre, atypiske mønstre observeres. Translokation, der Normalt Signalmønster FUS-genet ved 16p11 Forventet mønster 1F1R1G Se de lokale eller generelle retningslinjer for fortolkning af andre signalmønstre end det der vises i tabellen.
Seite 131 Kreatech FISH probes suboptimale resultater. Der er ingen tydelige tegn på forurening og/ eller ustabilitet af proben. Andre opbevaringsforhold end dem, der er specificeret herover, skal verificeres af brugeren. Fejlfinding Forbehandling (overdigestion): Brugsanvisning til BOND Enzyme Pretreatment kit (AR9551) anbefaler en fortynding med 1 dråbe Enzyme Concentrate 1 i 7 ml Diluent, som skal registreres som *Enzyme 1 i BOND-softwaren. Dette *Enzyme 1 kan være for stærkt for nogle prøver, når det bruges i kombination med Heat Induced Epitope Retrieval (HIER), og resultere i overfordøjet væv. En sekundær fortynding af *Enzyme 1 (op til 1:300 fortynding) anbefales, og en separat registrering af reagenset på BOND-systemet som *Enzyme 5 anbefales for at undgå forvirring.
Seite 132 Antal tests op til 40 tests op til 40 tests Kontakt din lokale distributør eller det regionale Leica Biosystems- kontor for at rapportere enhver usædvanlig farvning. Produktspecifikke begrænsninger Brugere, som afviger fra anbefalede testprocedurer, skal acceptere ansvar for fortolkning af patientresultater under disse omstændigheder. Protokoltider kan variere pga. variation i vævstype, fiksering og bearbejdning. Desuden kan BOND-enzymkoncentration...
Seite 133 Kreatech FISH probes Yderligere information Yderligere information om in situ -hybridisering med BOND-reagenser kan findes i din BOND-brugerdokumentation. Advarsler og forholdsregler • Dette produkt er kun beregnet til in vitro -diagnostisk brug • K un til laboratorie-/professionel brug • K reatech FISH probes er beregnet til brug på BOND-systemer. • Brugikke reagenser efter udløbsdatoen angivet på pakkens etiket • B ær passende beskyttelsestøj,...
Seite 134 • Se SDS for alle detaljer. Kontakt din lokale distributør eller regionale Leica Biosystems-kontor for at få en kopi af Safety Data Sheet. Sikkerhedsdatablade (Safety Data Sheets) er tilgængelige på Leica Biosystems hjemmeside, www.LeicaBiosystems.com • Prøver fra før og efter fixering og resterende probevolumen, samt alle materialer udsat for dem, bør håndteres, som om de er i...
Seite 135 Kreatech FISH probes • Benyt aldrig mundpipettering, og undgå berøring af hud og slimhinder med reagenser eller prøver • Hvis reagenser eller prøver kommer i kontakt med følsomme områder, vaskes med rigelige mængder vand. Søg lægehjælp • Spild opsamles med det samme vha. egnede engangsmaterialer • Alle materialer skal bortskaffes i overensstemmelse med lokal lovgivning.
Seite 136 Kreatech FISH probes...
Seite 137 Kreatech FISH probes Kreatech™ FISH Probları FUS (16p11) Break – XL for BOND Katalog No: KBI-XL017 Amaçlanan Kullanım In vitro tanılama kullanımı içindir BOND için FUS (16p11) Break - XL, sarkomada formalinle fikse edilmiş, parafine gömülmüş (FFPE) doku kesitlerinde kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Problar, otomatik bir BOND sistemi (BOND- MAX sistemi ve BOND-III sistemini kapsar) üzerinde BOND FISH Kit (DS9636) ile kullanılmalıdır.
Seite 138 Kreatech FISH probes tedavinin, Kreatech FISH Probları hibridizasyonunun ve BOND FISH kit kullanarak hibridizasyon sonrası sağlam bir yıkama işleminin ardından, doku kesitleri manuel olarak kurutulur ve DAPI ile monte edilir. Sonuçlar, önerilen filtrelerin uygun dalga boylarıyla kullanılması suretiyle, floresan mikroskopi ile yorumlanır. Sağlanan Reaktifler Ürün Ürün No. Hacim Bileşim Açıklaması pKBI- 1 ml, 10x PlatinumBright™495 (16p11) XL017G...
Seite 139 Kreatech FISH probes Tablo 1: Probların kilobaz çifti (kB), kromozom bandı ve STS marker'ları ile tanımlanan genom konumunda boyutunun gösterildiği kromozom haritası. Genin yanındaki ok, genin transkripsiyon yönünü gösterir. Yeşil FUS (16p11) Proximal - XL. Kırmızı FUS (16p11) Distal - XL. Kromozom haritaları hakkında daha fazla bilgi için Leica web sitesini ziyaret edin. D16S2574E 785 kB RH47854 16p11.2 SHGC-106097 560 kB D16S2933E 1) Haritalar ve konumlar, UCSC genome browser, build GRCh37/hg19, Feb.2009'a dayalıdır.
Seite 140 Kreatech FISH probes İhtiyaç Duyulan Fakat Sağlanmayan Malzemeler BOND sistemini (BOND-MAX sistemini ve BOND-III sistemini kapsar) kullanarak numune tedavisi ve in situ hibridizasyon için gerekli olan malzemelerin tam listesi için BOND kullanıcı belgelerinde yer alan “BOND Reaktiflerinin Kullanımı” bölümüne bakınız. BOND sisteminde (BOND-MAX sistemini ve BOND-III sistemini kapsar) Kreatech FISH Probları kullanarak uygun hasta malzemesinin analizi için Jenerik BOND reaktiflerinin yanı sıra özellikle aşağıdaki reaktifler gereklidir.
Seite 141 Kreatech FISH probes • DAPI (örnek LK-095A veya LK-096A) DAPI karşıt boyama, BOND sistemi üzerinde FISH protokolünün bir parçası olarak otomatik bir şekilde gerçekleştirilmez ve tercih edilen konsantrasyonda DAPI counterstain/antifade kullanılarak manuel bir şekilde yapılır. Numuneler Kreatech FISH Probları, ~5 µm kesilmiş FFPE dokuları üzerinde test edilmiştir. Doku blokları ve kesilen parçalar, optimum sonuçlar elde etmek için önerilen saklama ve işleme koşullarına uygun şekilde saklanmalıdır. Bkz. Leica web sitesi.
Seite 142 Kreatech FISH probes Reaktif Kullanılan Hacim (tavsiye edilen) Prob 1 (10x) - Kırmızı 1,0 ml Prob 2 (10x) - Yeşil 1,0 ml BOND Hybridization solution 8,0 ml (AR9037) Toplam hacim (1x son 10 ml konsantrasyon) Test 40 teste kadar Prob seyreltildikten sonra, karışım uygun bir BOND konteynerine (titrasyon konteyneri, 7 ml açık konteyner veya 30 ml açık konteyner, hazırlanan hacimlere bağlı olarak) ve BOND sistemine “DNA probe” olarak kaydedilir.
Seite 143 Kreatech FISH probes Kullanım talimatları: Ön İşlem ve Protokoller Kreatech FISH Probları, BOND FISH kit, BOND yardımcı reaktifleri ve Tablo 2'de gösterilen BOND ön işlem ve boyama protokolleri kullanılarak doğrulanmıştır. Kullanıcı tarafından kullanılan dokuya göre son protokol değişiklik gösterebilir. Belirtilen protokollerden yapılan tüm sapmalar, kullanıcı tarafından doğrulanmalıdır.
Seite 144 Kreatech FISH probes Sinyal düzenleri BOND için FUS (16p11) Break - XL, FFPE dokularında FUS geni bulunan translokasyonları tespit etmek için kullanılabilir. Prob, Tablo 2'de gösterilen protokoller kullanılarak sarkoma dokularda valide edilmiştir. BOND için FUS (16p11) Break - XL, 16p11'te FUS gen bölgesinin translokasyonlarını tespit etmek için çift renkli bir test olarak tasarlanmıştır. Normal sinyal paterni iki kırmızı/yeşil füzyon sinyalini (2F) gösterirken, FUS geni bulunan bir translokasyon, standart kromozom 16 için bir füzyon sinyaline ve translokasyon (1F1R1G) için bir kırmızı ve bir yeşil sinyale yol açar. Diğer tipik olmayan düzenlerle karşılaşılırsa takip testleri yapılması...
Seite 145 Kreatech FISH probes Saklama ve Stabilite Probları güçlü ve doğrudan güneş ışığından koruyun. 2 - 8 °C sıcaklıkta saklayın. Açılmamış ürün, bu koşullar altında, flakon üzerinde belirtilen son kullanma tarihine kadar stabil kalır. Seyreltilmemiş reaktifi kullandıktan hemen sonra 2 - 8 °C'ye getirin. BOND konteynerinde saklanan, seyreltilmiş/karıştırılmış reaktif, çalıştırıldıktan sonra 2 - 8 °C'ye tekrar getirilmelidir. Prob seyreltildikten sonra, prob karışımları 30 güne kadar stabil kalır. Bu sürenin sonunda, seyreltilmiş karışım standardın altında sonuçlar verebilir. Probun kontamine olduğunu ve/veya stabil olmadığını belirten gözle görülür herhangi bir belirti yok. Yukarıda belirtilenlerin dışındaki saklama koşulları kullanıcı tarafından doğrulanmalıdır. Sorun Giderme Ön işlem (aşırı sindirim): BOND kullanım talimatları Enzyme Pretreatment kit (AR9551) için BOND yazılımına *Enzyme 1 olarak kaydedilecek 7 ml Diluent içerisine 1 damla Enzyme Concentrate 1 ile seyreltme önerilir.
Seite 146 Kreatech FISH probes önerilir. Alternatif olarak, *Enzyme 1'in seri bir şekilde seyreltilmesi yerine, Enzyme concentrate 1 1:3000 oranına kadar doğrudan seyreltilebilir. Prob seyreltme ve sinyal yoğunluğu: 1x son prob konsantrasyonunun kullanılması önerilir, fakat optimum prob dengesi doku yaşı, doku fiksasyonu, ön işlem protokolü ve kişisel tercih gibi faktörlere bağlıdır. Optimum konsantrasyonlar ve prob oranları değişiklik gösterebilir ve son kullanıcı tarafından deneysel olarak belirlenecektir. Reaktif Kullanılan Örneğin: Yeşil sinyal gücünü azaltma hacim (önerilir) Prob 1 (10x) - 1,0 ml...
Seite 147 Kreatech FISH probes Ürüne Özgü Sınırlamalar Önerilen test prosedürlerinin dışına çıkan kullanıcılar, hasta sonuçlarının bu koşullar altında yorumlanmasının sorumluluğunu üstlenmelidir. Doku türü, fiksasyon ve işleme farklılıkları nedeniyle protokol süreleri değişiklik gösterebilir. Bununla birlikte, BOND Enzim konsantrasyonu ve inkübasyon süresi doku türü, işleme ve fiksasyon koşullarına bağlı olarak optimizasyon gerektirebilir. Daha Fazla Bilgi BOND reaktifleriyle in situ hibridizasyon hakkında daha fazla bilgi için BOND kullanıcı belgelerini inceleyin. Uyarılar ve Önlemler Bu ürün, yalnızca in vitro tanılama kullanımı içindir •...
Seite 148 T üm ayrıntılar için SDS'ye danışın. Güvenlik Veri Sayfasının bir kopyasını almak için yerel distribütörünüzle ya da Leica Biosystems'in bölge ofisiyle iletişime geçin. Güvenlik Veri Sayfaları Leica Biosystems web sitesinde (www.LeicaBiosystems.com) bulunur Fiksasyon öncesi ve sonrasında numuneler, onlara maruz kalan tüm malzemeler ve arta kalan prob hacmi, enfeksiyon taşıyabileceği göz önünde bulundurularak taşınmalı ve gerekli önlemler alınarak imha edilmelidir...
Seite 149 Kreatech FISH probes zarının reaktifler veya numunelerle ile temasından kaçının • R eaktiflerin veya numunelerin hassas bölgelere temas etmesi durumunda, bol su ile yıkayın. Tıbbi yardım alın • U ygun tek kullanımlık malzemeleri kullanarak döküntüleri hemen temizleyin • T üm malzemeler, yerel mevzuata uygun bir biçimde bertaraf edilmelidir. • B elirtilenlerin dışında alma adımları, inkübasyon süreleri ve sıcaklıkları kullanıldığında hatalı sonuçlara sebebiyet verilebilir. Bu tür farklılıklar kullanıcı tarafından doğrulanmalıdır Kaynakça 1. C linical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule...
Seite 150 LeicaBiosystems.com DANGER 8°C long 2°C term storage FORMAMIDE Kreatech Biotechnology B.V. Vlierweg 20 1032 LG Amsterdam The Netherlands www.LeicaBiosystems.com For detailed information about European sales offices, please visit our website: LeicaBiosystems.com Patents: These products these products subject to proprietary rights. The probes in these products are produced using the Janssen Diagnostics, LLC REPEAT- FREE™ technology and labeled with the Universal Linkage System (ULS™).

Diese Anleitung auch für:

Kbi-xl017